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parada0927

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[交流] 【转帖】HRP标记抗体已有7人参与

有没有人做过HRP方面的标记工作，想咨询一下各位高手！

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自由生活

1楼 2010-08-10 10:13:41

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三妹妹

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引用回帖:

Originally posted by parada0927 at 2010-08-12 10:40:55:
那楼上的那位能不能提供具体的标记抗体的方法呢？谢了

曾经做过的方法，希望对你有用：
酶标抗体（Ab-HRP）制备采用改良过碘酸钠法：10 mg HRP溶于1 mL 蒸馏水，加入新配0.06 mol/L 的过碘酸钠溶液1 mL，混匀置冰箱30min，取出后加入0.16 mol/L乙二醇水溶液1mL，于室温放置30min后加入含20 mg Ab抗体的水溶液4 mL，混匀后透析过夜，吸出加5 mg/mL NaBH4 溶液0.7mL，混匀置冰箱2h，加等体积饱和硫酸铵溶液，4℃静置1h后，3 000 r/min低温离心30min，弃上清。将沉淀用0.02 mol/L pH7.4的PBS溶解后，装入透析袋中，放入0.02 mol/L pH7.4 的磷酸盐缓冲溶液（PBS）中，4℃透析，直至NH4+去除后（奈氏试剂检测），10 000 r/min离心30min，收集上清液即得抗体的酶结合物，加入等量甘油，混匀，分装，保存于-20℃。