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parada0927

金虫 (小有名气)

[交流] 【转帖】HRP标记抗体 已有7人参与

有没有人做过HRP方面的标记工作,想咨询一下各位高手!
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三妹妹

金虫 (小有名气)


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引用回帖:
Originally posted by parada0927 at 2010-08-12 10:40:55:
那楼上的那位能不能提供具体的标记抗体的方法呢?谢了

曾经做过的方法,希望对你有用:
酶标抗体(Ab-HRP)制备采用改良过碘酸钠法:10 mg HRP溶于1 mL 蒸馏水,加入新配0.06 mol/L 的过碘酸钠溶液1 mL,混匀置冰箱30min,取出后加入0.16 mol/L乙二醇水溶液1mL,于室温放置30min后加入含20 mg Ab抗体的水溶液4 mL,混匀后透析过夜,吸出加5 mg/mL NaBH4 溶液0.7mL,混匀置冰箱2h,加等体积饱和硫酸铵溶液,4℃静置1h后,3 000 r/min低温离心30min,弃上清。将沉淀用0.02 mol/L pH7.4的PBS溶解后,装入透析袋中,放入0.02 mol/L pH7.4 的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,4℃透析,直至NH4+去除后(奈氏试剂检测),10 000 r/min离心30min,收集上清液即得抗体的酶结合物,加入等量甘油,混匀,分装,保存于-20℃。
9楼2010-08-12 14:45:55
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励 2010-08-11 11:37:17
有很多经典的方法可供参考,比如说戊二醛法,过碘酸钠法。这些都可以在免疫学实验的书上找到详细的说明。如果是为了省事,也可以购买试剂盒进行标记。
52187644
2楼2010-08-10 10:29:59
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parada0927

金虫 (小有名气)

有没有这样的直接标记方法可以提供一下,谢谢哦!
自由生活
3楼2010-08-10 14:23:51
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你是做ELISA还是?HRP标记什么?说的不清不楚~
4楼2010-08-10 14:52:01
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