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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ELISA实验中，HRP酶标抗体浓度滴定时是否需要封闭？
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25650560

铜虫 (正式写手)

[交流] ELISA实验中，HRP酶标抗体浓度滴定时是否需要封闭？ 已有2人参与

看到不少网络上的文章以及《免疫学和免疫学检验》对HRP酶标抗体浓度滴定方法介绍如下：
引用回帖:
棋盘滴定法选择包被抗原工作浓度

（1）用包被液将抗原作一系列稀释后进行包被，洗涤。

（2）将强阳性参考血清、弱阳性参考血清和阴性参考血清用稀释液作1:100稀释，加样，保温，洗涤。

（3）加按工作浓度稀释的酶标抗人IgG抗体，保温，洗涤。

（4）加底物显色。加酸终止反应后读取A值。

（5）选择强阳性参考血清的A值为0.8左右、阴性参考血清的A值小于0.1的包被抗的的稀释度作为工作浓度。表15-1为本例的测定结果，表中数字为A值。从表中可见1:200为最舒适的工作浓度。

本人要做的试剂盒是ELISA间接法，需要对包被抗原酶标板进行封闭。而这是利用直接法进行酶标抗体的浓度滴定实验，其中并没有说明是否需要进行封闭，那么请问大家，这个步骤是否需要进行封闭呢？请说明为什么！谢谢大家了！急

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-20 at 12:23 ]
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25650560

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1楼 2009-10-20 09:34:24
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xingwei_wei

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-07-21 04:36:02
从ELISA角度说，包被过后AG基本包被在固相载体上，封闭的作用是使AG-AB能够一对一结合，并且使AG完全包被在固相载体上，并防止变异
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没个性，不签名
8楼2010-07-20 23:17:31
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25650560

铜虫 (正式写手)
坐等高人回答
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2楼2009-10-20 09:36:31
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yjj5158

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
25650560(金币+1,VIP+0):谢谢先，我的QQ是158059288，能否加我，我想向您请教一些问题！！！ 10-22 18:56
25650560(金币+5,VIP+0):再次感谢先，敬请继续关注，谢谢！ 10-22 19:07
需要进行封闭，一般用洗涤液配的1%BSA，明胶，酪蛋白或者脱脂奶粉，可以试试哪种更好
赞一下(8人) 回复此楼
4楼2009-10-22 10:50:34
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yjj5158

金虫 (初入文坛)
★
25650560(金币+1,VIP+0):我们是做ELISA试剂盒，主要用于检测自身抗体和感染类项目的检测。另外我想问，您所说的需要进行封闭，是你们的经验吗？或者说你们的试剂盒研发的过程中也是这么做的？但是我看很多资料里面关于酶标抗体的浓度的选择并没有说到需要进行封闭！谢谢您能继续解答，期待中！ 10-22 18:59
用明胶，酪蛋白或者脱脂奶粉进行封闭。我们公司就是做ELISA试剂盒的。你主要是检测什么的？
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5楼2009-10-22 10:52:37
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