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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双抗体夹心ELISA，阳性孔，样品孔和阴性对照全部不显色，怎么回事
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

[求助] 双抗体夹心ELISA，阳性孔，样品孔和阴性对照全部不显色，怎么回事 已有1人参与

双抗体夹心ELISA，阳性孔，样品孔和阴性对照全部不显色

已经单独用二抗和显色液加一起试过了，显色很明显的，二抗是新换的，二抗和显色液没有问题

操作没有问题的呀，以前做的好好的，这次会不会是因为4度过夜包被的抗体有问题？ 这个抗体只在4度放了一个月啊，难道太久失效了吗？（制作抗体的人说不反复冻融，一直在4度可以放几个月没问题的啊）
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1楼 2012-10-24 19:56:30
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
求解答啊
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2楼2012-10-25 10:07:41
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
今天又遭遇了这个问题，真的不知道什么原因啊，希望大家讨论一下
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3楼2012-10-30 16:56:12
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lieying18

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-10-31 08:10:27
双抗体夹心ELISA，阳性孔，样品孔和阴性对照全部不显色
已经单独用二抗和显色液加一起试过了，显色很明显的，二抗是新换的，二抗和显色液没有问题
   根据你的实验结果可以推断，结果没有显色是因为包板的抗体失效，很明显。另外，抗体在4度放几个月没有问题是因为无菌操作的情况下，而且保证冰箱没有任何问题的情况下。另外，可以验证一下你没有包被的抗体，直接点膜做DOT-ELISA，一天肯定出结果。
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4楼2012-10-30 17:59:45
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lieying18 at 2012-10-30 17:59:45
双抗体夹心ELISA，阳性孔，样品孔和阴性对照全部不显色
已经单独用二抗和显色液加一起试过了，显色很明显的，二抗是新换的，二抗和显色液没有问题
   根据你的实验结果可以推断，结果没有显色是因为包板的抗体失效 ...

谢谢，前天换了新的包被抗体，有结果，虽然显色比较浅。可是今天又做的时候，又不显色了，实在不知道是什么原因，包被抗体，一抗和二抗全是新换的了，难道是显色液（自己配的）在4度放太久了吗？
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5楼2012-10-30 21:43:36
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sunxu7213976

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

把包被的抗体浓度提高，试试看
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6楼2012-10-31 12:14:35
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sunxu7213976 at 2012-10-31 12:14:35
把包被的抗体浓度提高，试试看

谢谢。不过这个条件（包被，洗涤，一抗二抗浓度等等）我以前做过很多次，都没有问题的，现在不知道是怎么了，就是不显色
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7楼2012-10-31 13:22:05
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sunxu7213976

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是不是有的试剂过期了，或者酶联板不是同一批号的
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8楼2012-11-01 10:26:20
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sunxu7213976 at 2012-11-01 10:26:20
是不是有的试剂过期了，或者酶联板不是同一批号的

谢谢，已经知道问题所在了，是检测抗体在4度放太久失效了，说明书上写放2周，实际上最多一周就不能用了
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9楼2012-11-01 10:43:22
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lieying18 at 2012-10-30 17:59:45
双抗体夹心ELISA，阳性孔，样品孔和阴性对照全部不显色
已经单独用二抗和显色液加一起试过了，显色很明显的，二抗是新换的，二抗和显色液没有问题
   根据你的实验结果可以推断，结果没有显色是因为包板的抗体失效 ...

谢谢，已经知道问题所在了，是检测抗体在4度放太久失效了，说明书上写放2周，实际上最多一周就不能用了
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10楼2012-11-01 10:43:55
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