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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)


[交流] 双抗体夹心ELISA,阴性值很高,怎么回事呢

一直的实验条件都没有变,以前做的空白血浆OD最高也就0.2多,好的话小于0.1
可是这两次的空白血浆OD就是0.6-0.7,这也太离谱了吧

我是用5%BSA进行封闭的,这两次买的BSA和以前的不是一个公司,美国罗氏的,应该也不会有问题啊,手动洗板4次,每次5分钟

求救,导致阴性值升高的原因都有哪些啊??

[ Last edited by silicare on 2014-4-3 at 10:45 ]
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yaojc

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
阿娇阿娇: 金币+5 2012-10-05 18:28:33
silicare: BioEPI+1 2014-04-04 09:58:14
1、孵育时最好使用封口膜,防止液体挥发。
2、手工洗板需防止孔间交叉污染。
3、观察样本是否长菌,变浑浊。
4、显色剂是否过期,TMB是否有肉眼可见的浅蓝色。
5、微孔板底部是否洁净。
暂时就想到这些,希望有帮助。
39楼2012-10-05 15:13:55
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普通回帖

blackdogzmz

木虫 (职业作家)



阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
不懂,但帮顶一下,让别人来答.....
2楼2012-09-26 10:32:08
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燃烧de笑

木虫 (知名作家)



阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
不懂,但帮顶一下
3楼2012-09-26 10:48:51
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xiaoqi5992

银虫 (正式写手)


★ ★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-10-02 06:54:35
1.季节的变化会不会导致显色的差异啊,加样操作,洗板应该都是在室温下进行的吧。
2.显色底物放的是不是时间长了啊。
我能想到的就这两点了,不知道对不对。
8楼2012-09-26 17:09:36
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)


引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaoqi5992 at 2012-09-26 17:09:36
1.季节的变化会不会导致显色的差异啊,加样操作,洗板应该都是在室温下进行的吧。
2.显色底物放的是不是时间长了啊。
我能想到的就这两点了,不知道对不对。

谢谢
9楼2012-09-26 17:14:50
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liufuliang

新虫 (知名作家)



阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
污染?
10楼2012-09-26 17:23:52
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lyd850119

金虫 (正式写手)



阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
光栅会不会有问题。。
12楼2012-09-26 17:24:33
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conanzzz

木虫 (正式写手)



阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
我也是...
16楼2012-09-26 17:39:55
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userhung

禁虫 (文学泰斗)



阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
温度影响的吧~~~~~~~~~~~~~~~`
19楼2012-09-26 17:57:37
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liufudong

禁虫 (职业作家)


阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

21楼2012-09-26 18:06:30
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)


引用回帖:
10楼: Originally posted by liufuliang at 2012-09-26 17:23:52
污染?

What?
26楼2012-09-27 09:39:10
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weigb503

铁杆木虫 (小有名气)



阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
把具体的实验步骤稍微写一下,不然不好分析了,中间很多因素导致阴性和空白OD值比较高。
27楼2012-09-29 08:28:06
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gcworm

木虫 (职业作家)



阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
路过,帮你顶一下
31楼2012-09-29 09:18:01
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chenguestc

木虫 (职业作家)



阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
如果这样的话,你的结果和你之前用另外一个公司的结果没有可比性了就。
即使通一个公司的产品不同批次也会有所差异结果,但是像你说的这么大差异没见过,只有这样,你以后所有试验,需要跟你现在结果进行比较的,全部用同样公司同样批次的,最后把你的BASELINE调高一点就行啦哈,这样结果才具有可能性。
我是ELISA和QPCR,ELISA值部分在0.1-0.3之间,而QPCR结果的LOG COPY NUMBER/ug值太高,全部都在3-8之间,因此我就设定其BASELINE为3,这样,所有数值就是LOG COPY NUMBER/ng, 都在0-5之间了。
32楼2012-09-29 09:27:44
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gcworm

木虫 (职业作家)


路过,帮你顶一下
33楼2012-09-29 17:36:07
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)


引用回帖:
39楼: Originally posted by yaojc at 2012-10-05 15:13:55
1、孵育时最好使用封口膜,防止液体挥发。
2、手工洗板需防止孔间交叉污染。
3、观察样本是否长菌,变浑浊。
4、显色剂是否过期,TMB是否有肉眼可见的浅蓝色。
5、微孔板底部是否洁净。
暂时就想到这些,希望有 ...

谢谢,我最近做的好几次,阴性孔阳性孔全部不显色,那个郁闷啊,东西都是新换的,只有显色液(自己配置的)在4度放了3个多月,难道失效了吗?
40楼2012-10-30 16:57:56
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wxm0322

银虫 (初入文坛)



阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
我也遇到这个问题了,感觉是洗的不彻底的问题
42楼2014-04-03 10:03:16
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简单回复
gkf1234楼
2012-09-26 11:07   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
chenghu5楼
2012-09-26 11:08   回复  
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sszzpp6楼
2012-09-26 11:26   回复  
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xxbis097楼
2012-09-26 11:28   回复  
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flyxu13楼
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clarktao14楼
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qwer.20楼
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orchem29楼
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wasxnbe38楼
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zzz11941楼
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