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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 双抗体夹心ELISA，阴性值很高，怎么回事呢
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

[交流] 双抗体夹心ELISA，阴性值很高，怎么回事呢

一直的实验条件都没有变，以前做的空白血浆OD最高也就0.2多，好的话小于0.1
可是这两次的空白血浆OD就是0.6-0.7，这也太离谱了吧

我是用5%BSA进行封闭的，这两次买的BSA和以前的不是一个公司，美国罗氏的，应该也不会有问题啊，手动洗板4次，每次5分钟

求救，导致阴性值升高的原因都有哪些啊？？

[ Last edited by silicare on 2014-4-3 at 10:45 ]
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1楼 2012-09-26 10:00:29
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yaojc

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
阿娇阿娇: 金币+5 2012-10-05 18:28:33
silicare: BioEPI+1 2014-04-04 09:58:14
1、孵育时最好使用封口膜，防止液体挥发。
2、手工洗板需防止孔间交叉污染。
3、观察样本是否长菌，变浑浊。
4、显色剂是否过期，TMB是否有肉眼可见的浅蓝色。
5、微孔板底部是否洁净。
暂时就想到这些，希望有帮助。
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39楼2012-10-05 15:13:55
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普通回帖

blackdogzmz

木虫 (职业作家)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
不懂,但帮顶一下,让别人来答.....
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2楼2012-09-26 10:32:08
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燃烧de笑

木虫 (知名作家)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
不懂,但帮顶一下
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3楼2012-09-26 10:48:51
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xiaoqi5992

银虫 (正式写手)
★ ★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-10-02 06:54:35
1.季节的变化会不会导致显色的差异啊，加样操作，洗板应该都是在室温下进行的吧。
2.显色底物放的是不是时间长了啊。
我能想到的就这两点了，不知道对不对。
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8楼2012-09-26 17:09:36
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaoqi5992 at 2012-09-26 17:09:36
1.季节的变化会不会导致显色的差异啊，加样操作，洗板应该都是在室温下进行的吧。
2.显色底物放的是不是时间长了啊。
我能想到的就这两点了，不知道对不对。

谢谢
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9楼2012-09-26 17:14:50
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liufuliang

新虫 (知名作家)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
污染？
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10楼2012-09-26 17:23:52
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lyd850119

金虫 (正式写手)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
光栅会不会有问题。。
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12楼2012-09-26 17:24:33
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conanzzz

木虫 (正式写手)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
我也是...
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16楼2012-09-26 17:39:55
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
温度影响的吧~~~~~~~~~~~~~~~`
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19楼2012-09-26 17:57:37
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liufudong

禁虫 (职业作家)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
21楼2012-09-26 18:06:30
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by liufuliang at 2012-09-26 17:23:52
污染？

What?
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26楼2012-09-27 09:39:10
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weigb503

铁杆木虫 (小有名气)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
把具体的实验步骤稍微写一下，不然不好分析了，中间很多因素导致阴性和空白OD值比较高。
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27楼2012-09-29 08:28:06
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gcworm

木虫 (职业作家)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
路过，帮你顶一下
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31楼2012-09-29 09:18:01
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chenguestc

木虫 (职业作家)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
如果这样的话，你的结果和你之前用另外一个公司的结果没有可比性了就。
即使通一个公司的产品不同批次也会有所差异结果，但是像你说的这么大差异没见过，只有这样，你以后所有试验，需要跟你现在结果进行比较的，全部用同样公司同样批次的，最后把你的BASELINE调高一点就行啦哈，这样结果才具有可能性。
我是ELISA和QPCR，ELISA值部分在0.1-0.3之间，而QPCR结果的LOG COPY NUMBER/ug值太高，全部都在3-8之间，因此我就设定其BASELINE为3，这样，所有数值就是LOG COPY NUMBER/ng, 都在0-5之间了。
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32楼2012-09-29 09:27:44
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gcworm

木虫 (职业作家)
路过，帮你顶一下
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33楼2012-09-29 17:36:07
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
39楼: Originally posted by yaojc at 2012-10-05 15:13:55
1、孵育时最好使用封口膜，防止液体挥发。
2、手工洗板需防止孔间交叉污染。
3、观察样本是否长菌，变浑浊。
4、显色剂是否过期，TMB是否有肉眼可见的浅蓝色。
5、微孔板底部是否洁净。
暂时就想到这些，希望有 ...

谢谢，我最近做的好几次，阴性孔阳性孔全部不显色，那个郁闷啊，东西都是新换的，只有显色液（自己配置的）在4度放了3个多月，难道失效了吗？
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40楼2012-10-30 16:57:56
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wxm0322

银虫 (初入文坛)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
我也遇到这个问题了，感觉是洗的不彻底的问题
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42楼2014-04-03 10:03:16
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gkf1234楼
2012-09-26 11:07   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
chenghu5楼
2012-09-26 11:08   回复  
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sszzpp6楼
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xxbis097楼
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shannon201011楼
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