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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

[求助] 双抗体夹心ELISA,阳性孔,样品孔和阴性对照全部不显色,怎么回事 已有1人参与

双抗体夹心ELISA,阳性孔,样品孔和阴性对照全部不显色

已经单独用二抗和显色液加一起试过了,显色很明显的,二抗是新换的,二抗和显色液没有问题

操作没有问题的呀,以前做的好好的,这次会不会是因为4度过夜包被的抗体有问题? 这个抗体只在4度放了一个月啊,难道太久失效了吗?(制作抗体的人说不反复冻融,一直在4度可以放几个月没问题的啊)
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

求解答啊
2楼2012-10-25 10:07:41
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

今天又遭遇了这个问题,真的不知道什么原因啊,希望大家讨论一下
3楼2012-10-30 16:56:12
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lieying18

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-10-31 08:10:27
双抗体夹心ELISA,阳性孔,样品孔和阴性对照全部不显色
已经单独用二抗和显色液加一起试过了,显色很明显的,二抗是新换的,二抗和显色液没有问题
   根据你的实验结果可以推断,结果没有显色是因为包板的抗体失效,很明显。另外,抗体在4度放几个月没有问题是因为无菌操作的情况下,而且保证冰箱没有任何问题的情况下。另外,可以验证一下你没有包被的抗体,直接点膜做DOT-ELISA,一天肯定出结果。
4楼2012-10-30 17:59:45
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lieying18 at 2012-10-30 17:59:45
双抗体夹心ELISA,阳性孔,样品孔和阴性对照全部不显色
已经单独用二抗和显色液加一起试过了,显色很明显的,二抗是新换的,二抗和显色液没有问题
   根据你的实验结果可以推断,结果没有显色是因为包板的抗体失效 ...

谢谢,前天换了新的包被抗体,有结果,虽然显色比较浅。可是今天又做的时候,又不显色了,实在不知道是什么原因,包被抗体,一抗和二抗全是新换的了,难道是显色液(自己配的)在4度放太久了吗?
5楼2012-10-30 21:43:36
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sunxu7213976

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

把包被的抗体浓度提高,试试看
6楼2012-10-31 12:14:35
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sunxu7213976 at 2012-10-31 12:14:35
把包被的抗体浓度提高,试试看

谢谢。不过这个条件(包被,洗涤,一抗二抗浓度等等)我以前做过很多次,都没有问题的,现在不知道是怎么了,就是不显色
7楼2012-10-31 13:22:05
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sunxu7213976

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是不是有的试剂过期了,或者酶联板不是同一批号的
8楼2012-11-01 10:26:20
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by sunxu7213976 at 2012-11-01 10:26:20
是不是有的试剂过期了,或者酶联板不是同一批号的

谢谢,已经知道问题所在了,是检测抗体在4度放太久失效了,说明书上写放2周,实际上最多一周就不能用了
9楼2012-11-01 10:43:22
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lieying18 at 2012-10-30 17:59:45
双抗体夹心ELISA,阳性孔,样品孔和阴性对照全部不显色
已经单独用二抗和显色液加一起试过了,显色很明显的,二抗是新换的,二抗和显色液没有问题
   根据你的实验结果可以推断,结果没有显色是因为包板的抗体失效 ...

谢谢,已经知道问题所在了,是检测抗体在4度放太久失效了,说明书上写放2周,实际上最多一周就不能用了
10楼2012-11-01 10:43:55
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