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蓝默儿金虫 (小有名气)
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[求助]
ELISA空白值过高 已有2人参与
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| 进行的是夹心ELISA，用多抗做包被抗体，抗原为原核表达的蛋白，之后加酶标单抗。空白对照孔是不加抗原，加的是PBS，其它相同。 |
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antibodyknow
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【答案】应助回帖
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蓝默儿: 金币+3, ★有帮助 2014-05-23 09:43:10
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两种可能： 1.你的包被用的多抗与酶标单抗之间有交叉反应。检查一下你的多抗是哪种多抗：鼠多抗，兔多抗还是羊多抗？你的酶标单抗与多抗最好是同一种来源。多抗做包被抗体本身就不是一个好选择，容易出现交叉反应，导致背景高。 2.你的整个ELISA过程是否封闭、洗涤充分。建议在所用的封闭和洗涤buffer中加Tween20至0.1%，减少非特异性结合。 3.建议做一个完全空白对照，即包被时用PBS，封闭环节正常，样品用PBS，然后正常加酶标二抗。可以初步判断你的ELISA系统是否正常，进而可以判断出你的多抗和二抗间是否有交叉反应。 祝好运！ |
2楼2014-05-22 22:37:00
蓝默儿
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3楼2014-05-23 09:44:53
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10