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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » ELISA空白值过高
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蓝默儿

金虫 (小有名气)

[求助] ELISA空白值过高 已有2人参与

进行的是夹心ELISA，用多抗做包被抗体，抗原为原核表达的蛋白，之后加酶标单抗。空白对照孔是不加抗原，加的是PBS，其它相同。
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微笑，自信，加油
1楼 2014-05-22 16:56:48
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antibodyknow

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蓝默儿: 金币+3, ★有帮助 2014-05-23 09:43:10
两种可能：
1.你的包被用的多抗与酶标单抗之间有交叉反应。检查一下你的多抗是哪种多抗：鼠多抗，兔多抗还是羊多抗？你的酶标单抗与多抗最好是同一种来源。多抗做包被抗体本身就不是一个好选择，容易出现交叉反应，导致背景高。
2.你的整个ELISA过程是否封闭、洗涤充分。建议在所用的封闭和洗涤buffer中加Tween20至0.1%，减少非特异性结合。
3.建议做一个完全空白对照，即包被时用PBS，封闭环节正常，样品用PBS，然后正常加酶标二抗。可以初步判断你的ELISA系统是否正常，进而可以判断出你的多抗和二抗间是否有交叉反应。
祝好运！
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2楼2014-05-22 22:37:00
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蓝默儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by antibodyknow at 2014-05-22 22:37:00
两种可能：
1.你的包被用的多抗与酶标单抗之间有交叉反应。检查一下你的多抗是哪种多抗：鼠多抗，兔多抗还是羊多抗？你的酶标单抗与多抗最好是同一种来源。多抗做包被抗体本身就不是一个好选择，容易出现交叉反应， ...

谢谢您的帮助，我的多抗和单抗是同一种来源，鼠源，但是多抗量少没有进行纯化。可能没纯化杂蛋白多引起的？
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微笑，自信，加油
3楼2014-05-23 09:44:53
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159236478

至尊木虫 (知名作家)

游来游去之一级游神

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
二楼分析挺到位。只是不太同意封闭封闭液中加表面活性剂，降低分散质的表面张力，增加分散质在溶剂中的分散能力，洗涤buffer中加Tween20至0.1%还可以更高。
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云山苍苍，江水泱泱，先生之风，山高水长
4楼2014-05-23 19:39:33
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碧柯

新虫 (初入文坛)
请问楼主解决了没有，同遇到这样的问题

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5楼2016-12-23 13:41:46
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Qq16

新虫 (初入文坛)
我用PBS缓冲作为空白对照，OD值在0.07左右，以空白血清作为空白对照，OD值在1以上，求助各位是怎么回事

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6楼2019-09-20 15:08:24
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