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我要睡觉

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化(二聚体)已有1人参与

大家好!我在做一个蛋白,但是在表达的过程中,跑胶出来的分子量大了一倍,想说是不是二聚体,如果是的话我应该接着纯化么?如果最后纯化出来了怎么把二聚体分开?谢谢~~~~因为才开始做,很多地方都不懂,所以上来求助各位!
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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我要睡觉: 金币+6 2015-07-07 11:24:47
跑的SDS-PAGE吗?这种情况下蛋白二聚体不被打开的还是不是很多见的。表达量大吗?建议采用其他方法鉴定下,比如western blot之类的~
2楼2015-07-07 09:37:44
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我要睡觉

新虫 (小有名气)

是的,在SDS-PAGE胶上能看到明显的条带。那如果检测出来全是二聚体我还用继续往下面纯化么?还是说把二聚体把和目的蛋白分开(前提是有目的蛋白达),然后只纯化目的蛋白就好了。是不是我们对二聚体完全没有办法?
3楼2015-07-07 11:24:38
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a86052

金虫 (正式写手)

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引用回帖:
3楼: Originally posted by 我要睡觉 at 2015-07-07 11:24:38
是的,在SDS-PAGE胶上能看到明显的条带。那如果检测出来全是二聚体我还用继续往下面纯化么?还是说把二聚体把和目的蛋白分开(前提是有目的蛋白达),然后只纯化目的蛋白就好了。是不是我们对二聚体完全没有办法?

你应该查询下相关的文献,如果该蛋白本身就以二聚体形式发挥功能,那么直接纯化就可以了啊~还有就是有些蛋白本身有些修饰,跑出来的大小偏大不少也是可能的~
4楼2015-07-07 12:04:11
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我要睡觉

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by a86052 at 2015-07-07 12:04:11
你应该查询下相关的文献,如果该蛋白本身就以二聚体形式发挥功能,那么直接纯化就可以了啊~还有就是有些蛋白本身有些修饰,跑出来的大小偏大不少也是可能的~...

好的,谢谢~~~还要学习啊~~呵呵呵
5楼2015-07-07 13:14:44
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