| 查看: 9461 | 回复: 15 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
rola234新虫 (小有名气)
|
[求助]
PCR扩增没有结果，求教是引物Tm值相差太大，还是模板GC含量太高？ 已有8人参与
|
|
| 这两天通过PCR扩增一个基因，基因本身比较长，大约1800bp左右，这个基因序列的GC含量为66%，总体上看还算正常，但当中有三四个区段的GC含量特别特别高，就是出现连续几十个甚至上百个GC碱基这样的序列，我设计的上游引物Tm之大约50.6℃，下游引物引物带入了一个NotI酶切位点，因此Tm值达到了66.8℃，两个引物的Tm值相差得有点大，今天试着做了一次PCR，但没有结果，我将退火温度从50℃到65℃做了一个梯度，但P了10管，都没有结果，非特异性扩增也几乎没有，只有最下面有一些引物二聚体。我确信我没有加错或者漏加东西，而且琼脂糖电泳也没有问题，就不太清楚到底是什么导致了PCR扩增没有结果，考虑来考虑去，觉得只有引物和模板的问题比较大，但不确定问题到底出在哪，求教小木虫上的各位高手了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有117人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 引物GC含量高，怎么调整PCR体系？
已经有17人回复
- 基因组PCR用于验证RT-PCR引物的实验思路，请大虾们把把关
已经有21人回复
- 引物3’端有发夹结构，一定p不出来吗
已经有13人回复
- 荧光定量PCR 扩增曲线求助
已经有24人回复
- 高GC模版扩增不出条带，求PCR高手
已经有5人回复
- 引物退火温度怎么确定？
已经有26人回复
- PCR引物GC含量过低时候，如何调整PCR体系？
已经有6人回复
- PCR上下游引物TM值相差一般多少
已经有5人回复
- 求解释这pcr是啥问题，帮同学问的^_^
已经有29人回复
- 1.5kb的 PCR目的序列GC含量高达67%，引物Tm值达90℃，怎么P比较好？
已经有16人回复
- 【求助/交流】求富含GC的片段的PCR条件
已经有10人回复
- 【求助/交流】引物Tm值很高，PCR求助
已经有17人回复
- 【求助/交流】基因组PCR老P不出目的带
已经有39人回复
10楼2015-07-05 10:40:13
rola234
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2
- 散金: 5
- 帖子: 58
- 在线: 20.8小时
- 虫号: 2986195
- 注册: 2014-02-22
- 性别: GG
- 专业: 抗肿瘤药物药理
2楼2015-07-01 21:46:13
rola234
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2
- 散金: 5
- 帖子: 58
- 在线: 20.8小时
- 虫号: 2986195
- 注册: 2014-02-22
- 性别: GG
- 专业: 抗肿瘤药物药理
4楼2015-07-02 09:40:29
5楼2015-07-02 10:34:51
