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嗜睡狂魔

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE问题 已有3人参与

目的蛋白大小应该是64KD,纯化后,活性很高,透析过夜,SDS-PAGE鉴定,纯化前有目的条带,纯化后的蛋白64KD位置无条带,30多那有明显条带变亮,请教怎么回事啊?
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

二聚体?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-06-30 20:02:29
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嗜睡狂魔

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guoqin_shiyin at 2015-06-30 20:02:29
二聚体?

活性稳稳的很高,不能吧
3楼2015-07-02 17:40:22
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖


zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2015-07-07 22:08:03
估计是纯化前是两个亚基结构,纯化后亚基分离了。。。活性的话,是显色反应测定还是别的方法呢?
4楼2015-07-07 16:18:04
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Aaqqwwaqw

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蛋白降解了?中间有断裂?如果每次都出现这个问题,打个质谱看看吧。
5楼2015-07-09 08:58:02
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fengjunchen

铜虫 (小有名气)

这蛋白结构清楚不,有几个亚基?就算基因序列对应的六十多KD,肽链加工过程中也没准被剪成了各自三十多KD的两段哩。
WB抗体杂得出来不?
6楼2015-07-09 11:06:10
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嗜睡狂魔

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by fengjunchen at 2015-07-09 11:06:10
这蛋白结构清楚不,有几个亚基?就算基因序列对应的六十多KD,肽链加工过程中也没准被剪成了各自三十多KD的两段哩。
WB抗体杂得出来不?

如果被剪切了,还能保持这么好的活性嘛?
7楼2015-07-10 08:54:09
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fengjunchen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 嗜睡狂魔 at 2015-07-10 08:54:09
如果被剪切了,还能保持这么好的活性嘛?...

不是,你做酶活实验时可还是有活性的蛋白,即使如我猜测是由两个亚基构成,那两个亚基也是在一起的能够行使这个蛋白的功能。跑SDS-PAGE时蛋白就被线性化成肽链了,那不就分开了。
不过啊,这只是我的猜测。。。。
8楼2015-07-10 09:37:22
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