应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于tricine-sds-page的一些问题
81/1返回列表
查看: 1705  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhuyanran

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于tricine-sds-page的一些问题

我在跑小分子多肽电泳时，有几个问题想请大家给指导一下
（1）在浓缩胶和夹层胶条带都是压成一条线的，可是一进分离胶就扩散的很严重
（2）我的样品为什么在loading buffer里溶解后loading buffer和样品分层呢，上样时有白色沉淀
（3）现在marker跑的挺好的，可是样品死活跑不出来，而且分离胶扩散很严重
希望高手指点一二，谢谢啦！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-27 10:03:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-27 13:29:50
zhuyanran: 金币+5, ★有帮助, 希望多多指导，还有很多要请教的，谢谢了！ 2013-11-27 20:40:55
1. 你指溴酚蓝前沿扩散吗？
2. 怀疑你的样品本身含有一些成分，与SDS发生沉淀。你的样品是怎样提取的，有什么特殊试剂？
3. marker好说嘛胶没有问题。是样品本身的问题。我觉得你样品制备本身可能用了一些不相容的试剂。
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-27 12:46:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuyanran

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-27 12:46:34
1. 你指溴酚蓝前沿扩散吗？
2. 怀疑你的样品本身含有一些成分，与SDS发生沉淀。你的样品是怎样提取的，有什么特殊试剂？
3. marker好说嘛胶没有问题。是样品本身的问题。我觉得你样品制备本身可能用了一些不相容的 ...

您好，我用的loading buffer是G-250， 我的样品是微生物的胞外产物，我就用Nacl 离子交换纯化和水过分子筛纯化做的，没有用什么特殊的试剂，我用的loading buffer是参照2006年的tricine- sds-page来做的，配方是12%SDS,6%巯基乙醇，30%甘油，0.05%G-250,150mM Tris-cl， pH 6.8. 不知道这是不是有什么问题。在浓缩胶和夹层胶压缩的特别好，但是一进分离胶就扩散的很严重。
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-27 14:39:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhuyanran at 2013-11-27 14:39:32
您好，我用的loading buffer是G-250， 我的样品是微生物的胞外产物，我就用Nacl 离子交换纯化和水过分子筛纯化做的，没有用什么特殊的试剂，我用的loading buffer是参照2006年的tricine- sds-page来做的，配方是12 ...

你的loading buffer应该没有什么问题。样品的离子强度大对PAGE的影响很大，比方说含有较高浓度的盐或者磷酸根。如果marker没有问题，只能是样品的事情了。检查一下你的样品最终的buffer成分。
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-28 00:25:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuyanran

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-28 00:25:49
你的loading buffer应该没有什么问题。样品的离子强度大对PAGE的影响很大，比方说含有较高浓度的盐或者磷酸根。如果marker没有问题，只能是样品的事情了。检查一下你的样品最终的buffer成分。...

里面就是含有较高的nacl，但是分子量太小和盐分不开，反正是一溶解就有沉淀，而且也跑不出来条带。应该是没有磷酸根的。您有没有什么好的建议来除盐呢？
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-28 13:51:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhuyanran at 2013-11-28 13:51:52
里面就是含有较高的nacl，但是分子量太小和盐分不开，反正是一溶解就有沉淀，而且也跑不出来条带。应该是没有磷酸根的。您有没有什么好的建议来除盐呢？...

可以过脱盐柱或者透析。
赞一下 回复此楼
6楼2013-11-28 17:02:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuyanran

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-28 17:02:23
可以过脱盐柱或者透析。...

我用100-500的透析袋透析两个小时盐没除掉，但是我的样品已经没有活性了，我用多肽柱分离纯化的，但是没有和盐分开。所以我很郁闷，现在跑不出来条带就很着急，是不是哪个过程我出问题了？
赞一下 回复此楼
7楼2013-11-28 21:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhuyanran at 2013-11-28 21:42:14
我用100-500的透析袋透析两个小时盐没除掉，但是我的样品已经没有活性了，我用多肽柱分离纯化的，但是没有和盐分开。所以我很郁闷，现在跑不出来条带就很着急，是不是哪个过程我出问题了？...

透析除盐时间长短与透析方式、透析液量的多少有关。你要的酶活是否要结合辅助因子？有可能透析时辅助因子掉了。如果你只是为了跑变性电泳，是否有活性问题不大。如果你要活性样品，可能需要在透析液液中加入辅助因子或者透析完再加入重新结合。
赞一下 回复此楼
8楼2013-11-29 01:26:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhuyanran 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +3 www_q 2026-03-18 6/300 2026-03-19 22:28 by zhq0425
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +5 枫桥ZL 2026-03-18 7/350 2026-03-19 14:52 by 功夫疯狂
[考研] 求调剂 +3 Mqqqqqq 2026-03-19 3/150 2026-03-19 14:11 by peike
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 085600材料与化工 +5 安全上岸！ 2026-03-16 5/250 2026-03-18 15:33 by cmz0325
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 环境工程调剂 +8 大可digkids 2026-03-16 8/400 2026-03-18 09:36 by zhukairuo
[考研] 301求调剂 +9 yy要上岸呀 2026-03-17 9/450 2026-03-18 08:58 by 无际的草原
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭