应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于tricine-sds-page的一些问题
81/1返回列表
查看: 1722  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhuyanran

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于tricine-sds-page的一些问题

我在跑小分子多肽电泳时，有几个问题想请大家给指导一下
（1）在浓缩胶和夹层胶条带都是压成一条线的，可是一进分离胶就扩散的很严重
（2）我的样品为什么在loading buffer里溶解后loading buffer和样品分层呢，上样时有白色沉淀
（3）现在marker跑的挺好的，可是样品死活跑不出来，而且分离胶扩散很严重
希望高手指点一二，谢谢啦！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-27 10:03:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-27 13:29:50
zhuyanran: 金币+5, ★有帮助, 希望多多指导，还有很多要请教的，谢谢了！ 2013-11-27 20:40:55
1. 你指溴酚蓝前沿扩散吗？
2. 怀疑你的样品本身含有一些成分，与SDS发生沉淀。你的样品是怎样提取的，有什么特殊试剂？
3. marker好说嘛胶没有问题。是样品本身的问题。我觉得你样品制备本身可能用了一些不相容的试剂。
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-27 12:46:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuyanran

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-27 12:46:34
1. 你指溴酚蓝前沿扩散吗？
2. 怀疑你的样品本身含有一些成分，与SDS发生沉淀。你的样品是怎样提取的，有什么特殊试剂？
3. marker好说嘛胶没有问题。是样品本身的问题。我觉得你样品制备本身可能用了一些不相容的 ...

您好，我用的loading buffer是G-250， 我的样品是微生物的胞外产物，我就用Nacl 离子交换纯化和水过分子筛纯化做的，没有用什么特殊的试剂，我用的loading buffer是参照2006年的tricine- sds-page来做的，配方是12%SDS,6%巯基乙醇，30%甘油，0.05%G-250,150mM Tris-cl， pH 6.8. 不知道这是不是有什么问题。在浓缩胶和夹层胶压缩的特别好，但是一进分离胶就扩散的很严重。
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-27 14:39:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhuyanran at 2013-11-27 14:39:32
您好，我用的loading buffer是G-250， 我的样品是微生物的胞外产物，我就用Nacl 离子交换纯化和水过分子筛纯化做的，没有用什么特殊的试剂，我用的loading buffer是参照2006年的tricine- sds-page来做的，配方是12 ...

你的loading buffer应该没有什么问题。样品的离子强度大对PAGE的影响很大，比方说含有较高浓度的盐或者磷酸根。如果marker没有问题，只能是样品的事情了。检查一下你的样品最终的buffer成分。
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-28 00:25:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuyanran

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-28 00:25:49
你的loading buffer应该没有什么问题。样品的离子强度大对PAGE的影响很大，比方说含有较高浓度的盐或者磷酸根。如果marker没有问题，只能是样品的事情了。检查一下你的样品最终的buffer成分。...

里面就是含有较高的nacl，但是分子量太小和盐分不开，反正是一溶解就有沉淀，而且也跑不出来条带。应该是没有磷酸根的。您有没有什么好的建议来除盐呢？
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-28 13:51:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhuyanran at 2013-11-28 13:51:52
里面就是含有较高的nacl，但是分子量太小和盐分不开，反正是一溶解就有沉淀，而且也跑不出来条带。应该是没有磷酸根的。您有没有什么好的建议来除盐呢？...

可以过脱盐柱或者透析。
赞一下 回复此楼
6楼2013-11-28 17:02:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuyanran

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-28 17:02:23
可以过脱盐柱或者透析。...

我用100-500的透析袋透析两个小时盐没除掉，但是我的样品已经没有活性了，我用多肽柱分离纯化的，但是没有和盐分开。所以我很郁闷，现在跑不出来条带就很着急，是不是哪个过程我出问题了？
赞一下 回复此楼
7楼2013-11-28 21:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhuyanran at 2013-11-28 21:42:14
我用100-500的透析袋透析两个小时盐没除掉，但是我的样品已经没有活性了，我用多肽柱分离纯化的，但是没有和盐分开。所以我很郁闷，现在跑不出来条带就很着急，是不是哪个过程我出问题了？...

透析除盐时间长短与透析方式、透析液量的多少有关。你要的酶活是否要结合辅助因子？有可能透析时辅助因子掉了。如果你只是为了跑变性电泳，是否有活性问题不大。如果你要活性样品，可能需要在透析液液中加入辅助因子或者透析完再加入重新结合。
赞一下 回复此楼
8楼2013-11-29 01:26:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhuyanran 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程调剂289 +32 yang婷 2026-04-07 33/1650 2026-04-09 10:18 by wp06
[考研] 0703总分331求调剂 +18 ZY-05 2026-04-04 22/1100 2026-04-09 09:09 by 哦哦123
[考研] 材料307分求大佬组收留 +16 Hll胡 2026-04-07 16/800 2026-04-09 07:51 by 5268321
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +17 梁富贵险中求 2026-04-04 18/900 2026-04-08 22:53 by may_新宇
[考研] 0703调剂，一志愿天津大学319分 +23 haaaabcd 2026-04-05 26/1300 2026-04-08 16:19 by luoyongfeng
[考研] 一志愿生物与医药，296分，求调剂 +14 66鹿 2026-04-03 16/800 2026-04-08 10:38 by tjzhao
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 363求调剂 +9 zh096 2026-04-04 9/450 2026-04-07 21:51 by 418490947
[考研] 一志愿郑州大学材料与化工085600，求调剂 +34 吃的不少 2026-04-02 34/1700 2026-04-07 20:01 by lrll?l
[考研] 求调剂 +5 wos666 2026-04-03 5/250 2026-04-06 10:13 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +10 Hll胡 2026-04-04 10/500 2026-04-05 20:09 by nepu_uu
[考研] 工科08-机械专硕-求调剂 +3 雷欧飞踢 2026-04-02 3/150 2026-04-05 18:49 by 蓝云思雨
[考研] 085500机械专硕初试288求调剂 +3 GZJguo666- 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:06 by jkddd
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +6 cs0106 2026-04-05 6/300 2026-04-05 16:34 by imissbao
[考研] 工科求调剂 +15 11ggg 2026-04-03 15/750 2026-04-05 16:24 by zzx2138
[考研] 一志愿沪9，求生物学调剂，326分 +6 刘墨墨 2026-04-04 6/300 2026-04-04 19:44 by 唐沐儿
[考研] 怎么删帖子啊 +3 缝曦1000 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:20 by 土木硕士招生
[考研] 考研调剂 +3 15615482637 2026-04-03 3/150 2026-04-03 22:50 by ms629
[考研] 数二英二348求调剂 +4 hxdzj1 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:25 by zhq0425
[考研] 学硕288调剂!!! +3 小王xw123 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:20 by 啵啵啵0119
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭