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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » SDS-PAGE问题
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嗜睡狂魔

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE问题 已有3人参与

目的蛋白大小应该是64KD，纯化后，活性很高，透析过夜，SDS-PAGE鉴定，纯化前有目的条带，纯化后的蛋白64KD位置无条带，30多那有明显条带变亮，请教怎么回事啊？
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1楼 2015-06-30 17:17:39
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
二聚体？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-06-30 20:02:29
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嗜睡狂魔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guoqin_shiyin at 2015-06-30 20:02:29
二聚体？

活性稳稳的很高，不能吧
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3楼2015-07-02 17:40:22
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2015-07-07 22:08:03
估计是纯化前是两个亚基结构，纯化后亚基分离了。。。活性的话，是显色反应测定还是别的方法呢？
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4楼2015-07-07 16:18:04
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Aaqqwwaqw

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蛋白降解了？中间有断裂？如果每次都出现这个问题，打个质谱看看吧。
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5楼2015-07-09 08:58:02
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fengjunchen

铜虫 (小有名气)
这蛋白结构清楚不，有几个亚基？就算基因序列对应的六十多KD，肽链加工过程中也没准被剪成了各自三十多KD的两段哩。
WB抗体杂得出来不？
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6楼2015-07-09 11:06:10
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嗜睡狂魔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fengjunchen at 2015-07-09 11:06:10
这蛋白结构清楚不，有几个亚基？就算基因序列对应的六十多KD，肽链加工过程中也没准被剪成了各自三十多KD的两段哩。
WB抗体杂得出来不？

如果被剪切了，还能保持这么好的活性嘛？
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7楼2015-07-10 08:54:09
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fengjunchen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 嗜睡狂魔 at 2015-07-10 08:54:09
如果被剪切了，还能保持这么好的活性嘛？...

不是，你做酶活实验时可还是有活性的蛋白，即使如我猜测是由两个亚基构成，那两个亚基也是在一起的能够行使这个蛋白的功能。跑SDS-PAGE时蛋白就被线性化成肽链了，那不就分开了。
不过啊，这只是我的猜测。。。。
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8楼2015-07-10 09:37:22
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