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左眼

金虫 (小有名气)

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[求助] pet28a 在 BL21(不是DE3)中表达可以吗已有2人参与

如题。因为我看到说BL21（DE3）适合于含有T7表达系统的，但同样会增加本底表达，那我想要比较纯的蛋白，我PET28A 直接用BL21行吗

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1楼 2015-06-29 14:21:19

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luwei13566

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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左眼: 金币+10 2015-06-30 08:58:36

pET28a不在DE3的菌株里就不能表达蛋白。而且28a上不是有组氨酸标签吗，直接Ni柱纯化不就好了。

大家相互帮助哈

5楼2015-06-29 23:22:52

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左眼

金虫 (小有名气)

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现在出现的问题是蛋白不纯(用de3)，我想知道用非DE3体系表达纯度会变好吗

2楼2015-06-29 14:22:42

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我的体系里面还有连续的稀有密码子不知道是不是也有影响

3楼2015-06-29 14:36:12

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xieao1994

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【答案】应助回帖

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左眼: 金币+10, 谢谢 2015-06-30 08:58:50

本人觉得应该不能吧，毕竟pET-28a上面有t7启动子，该启动子好像对T7RNA聚合酶是特异性的，只有(DE3)系统才有编码T7RNA聚合酶的基因，如果行的话产量估计也不高，是很低很低。

4楼2015-06-29 23:04:25

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