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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 裂解液提蛋白
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mtyx

银虫 (小有名气)

[求助] 裂解液提蛋白 已有4人参与

我用裂解液提蛋白，离心后，说是取上清液，可是我离心后，不分层也没有沉淀，我想问一下是什么原因啊
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1楼 2015-06-27 10:45:41
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504775490

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
mtyx: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-06-30 08:46:59
引用回帖:
4楼: Originally posted by mtyx at 2015-06-29 11:02:26
是细胞，12孔板，每孔加入100ul的裂解液...

后续做WB的话，这点细胞有点点少的样子，建议用一小瓶长满的细胞或者一个皿的细胞量来提取细胞。如果细胞珍贵可以用6孔板，先将培养基弃掉，用PBS漂洗2~3次，加入200ul裂解液，或者直接加入1X上样缓冲液，用细胞刮刮下细胞，吸入到1.5ml EP管中煮沸5min后进行电泳。细胞较少的话导致蛋白浓度过低，有些低丰度的目的蛋白在做WB检测时有可能检测不到，导致白板。祝好~~~
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6楼2015-06-29 16:29:06
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sageyaya

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你提的是什么蛋白呢？细胞还是组织？多少量对应了多少裂解液呢？是不是加的太少了，没有完全裂解呢。
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2楼2015-06-27 16:39:33
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504775490

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mtyx: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-06-27 21:22:09
楼主提的样品是什么，细胞还是组织，如果是细胞的话，放入裂解液后将细胞团吹散，冰上裂解30min，12000rpm，4度离心15min取上清即可，如果是组织的话要先将组织样本冰上磨碎，可以匀浆，也可以液氮研磨，之后加裂解液冰上裂解30min，之后的步骤是一样的。裂解液中记得加入蛋白酶抑制剂，冰上裂解中间可以混匀几次。祝好~~
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3楼2015-06-27 17:59:43
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mtyx

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 504775490 at 2015-06-27 17:59:43
楼主提的样品是什么，细胞还是组织，如果是细胞的话，放入裂解液后将细胞团吹散，冰上裂解30min，12000rpm，4度离心15min取上清即可，如果是组织的话要先将组织样本冰上磨碎，可以匀浆，也可以液氮研磨，之后加裂解 ...

是细胞，12孔板，每孔加入100ul的裂解液
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4楼2015-06-29 11:02:26
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