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snowfling

新虫 (初入文坛)

[交流] 环境微生物RNA提取 已有5人参与

最近在提环境水体的RNA,采样方法为将水体微生物过在滤膜上,然后放在RNA later中进行保存。
提取过程使用了试剂盒和Trizol手工的方法,但是都出现了问题。

使用试剂盒时,在裂解液加乙醇溶解上柱的过程中出现了裂解液加乙醇分层的现象,感觉出现油状物分层。

使用Trizol提取的时候,将滤膜放在Trizol中裂解,裂解完离心,之后Trizol就分为了两层。现象如图所示~~

初步问了很多人,大家都是是RNA later溶液导致的这种现象
然后RNA就一直提不出来。

不知道大家提RNA的时候有没有遇到这种问题呢?出现之后提取效率会变低么?有没有什么好的解决方法呢?

环境微生物RNA提取
IMG_1219.JPG
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lenalee119

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也是从环境水体中提取RNA,也是先过滤在滤膜上然后提取。由于RNAlater会影响后续到RNA抽提,所以我有邮件问过TAKARA公司和 life technologies的人,都回复说建议先除去RNAlater后再进行RNA抽提。我最后的处理办法是每张滤膜上RNAlater只加20-50微升,这个量足以不使RNA分解,而又不会影响后续的试剂盒抽提或手工抽提(使用TAKARA公司的RNA试剂盒或和光制药的ISOGEN进行手工抽提都可以有效提取总RNA)。
3楼2015-09-16 13:49:47
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chenfeng0823

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
RNA Later中的各种离子浓度很高,建议离心前加一些水再离。
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2楼2015-07-24 11:09:57
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ypan

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用MP公司的试剂盒试一试
4楼2015-09-28 15:00:09
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ChenYFSCAU

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我采用了qiagen的RNA protector提取革兰氏阴性菌的RNA,后续采用qiagenRNA提取试剂盒,提取到的细菌总RNA有降解,也是提了好多次都有降解,但是,不加protector之后抽提的RNA就没有降解现象了。
后面我就不加这个protector了,快速提取RNA之后赶紧进行反转录成cDNA。
5楼2015-11-22 16:15:12
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