应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌RNA提取求大虾帮忙
101/1返回列表
查看: 2323  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shalimar1989

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌RNA提取求大虾帮忙 已有2人参与

本人要提取大肠杆菌的RNA做荧光定量PCR，本以为大肠的很好提，没想到提了1个多月也没有好结果，求指导！！！拜谢啊
我的问题如下：
1 菌液量如何控制，有报道说要10 +7数量级的细胞，可是1od菌浓度就已经10 +8数量级了吧？难道1OD的菌液就要稀释10倍？我稀释以后菌量很少
   根本提不出来，应该怎么去菌液呢？麻烦大虾指导清楚点，一般OD多少菌液取多少毫升，加多少Trizol？
2 加Trizol要反复吹打吗？静置多久合适？
3 加异丙醇后需要静置吗？多久合适？其实我没静置时也有提出来过，见图，只是降解严重也有DNA污染，会不会不静置沉淀不充分呢？
4 我发现用试管的菌液提取相对容易，而我转摇瓶发酵后就很难提取出来RNA了，取样也处于生长期的菌体，这个是什么问题呢？？？

图中是我提的试管培养12小时的菌液，没稀释，还能出现条带，发酵的菌液根本提不出来，一条带也没有，到底怎么回事呢。。。
大肠杆菌RNA提取求大虾帮忙
11.21.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-05 10:15:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eagles123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2014-01-05 16:16:15
最好还是用kit提吧， 所有器具都用RNase Zap 擦洗避免RNAJ降解， 然后用RNase free 的 DNase 降解DNA
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-01-05 11:04:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shalimar1989

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by eagles123 at 2014-01-05 11:04:12
最好还是用kit提吧， 所有器具都用RNase Zap 擦洗避免RNAJ降解， 然后用RNase free 的 DNase 降解DNA

已经买了TRIZOL了，如果能不换就不太想买试剂盒了。。。谢谢
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-05 12:04:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangpanfei

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2014-01-07 11:52:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shalimar1989

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yangpanfei at 2014-01-07 11:52:53
加Trizol后涡旋震荡30s,冰上放置15min；
加异丙醇后冰上放置0.5h;

请问你试过吗？放置半小时不是都降解吗？快速提取不是最重要的吗？有人说省去放置的时间，要快提才行，放置半小时。。。请问大侠有这样提过吗？效果好？
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-07 13:09:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangpanfei

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
6楼2014-01-07 15:04:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shalimar1989

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yangpanfei at 2014-01-07 15:04:52
我之前提过酵母的RNA，不过刚才说错了，加异丙醇后-20度放置半小时，这点时间是不能省的...

你的意思是要保证沉淀充分是吗？菌量有控制吗？
赞一下 回复此楼
7楼2014-01-07 21:43:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

irufver

新虫 (初入文坛)
楼主想问一下你提出来没？我正准备提，也是想从发酵液中提RNA，但是我在纠结何时取样比较好。
赞一下 回复此楼
8楼2015-05-06 19:06:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mabinbin0209

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by irufver at 2015-05-06 19:06:21
楼主想问一下你提出来没？我正准备提，也是想从发酵液中提RNA，但是我在纠结何时取样比较好。

你好，我最近也想提一下大肠的RNA，但是每次都降解，，请问你提出来了吗，可否指点一二
赞一下 回复此楼
9楼2015-12-02 20:22:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mabinbin0209

新虫 (初入文坛)
请问楼主，是否提出来未降解的RNA，求指点，本人最近一直在提，但是总是遇到跟你一样的问题，降解非常明显
赞一下 回复此楼
10楼2015-12-02 20:25:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shalimar1989 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211，0703化学305分求调剂 +25 严西西戏 2026-04-06 32/1600 2026-04-11 21:20 by zhouxiaoyu
[考研] 考研求调剂 +3 ban班小七 2026-04-11 3/150 2026-04-11 20:48 by may_新宇
[考研] 086003调剂求助 +21 苏弋万 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 20:25 by dongdian1
[考研] 295求调剂 +5 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-11 15:53 by Delta2012
[考研] 一志愿085502，267分求调剂 +11 再忙也要吃饭啊 2026-04-08 12/600 2026-04-11 11:08 by zhq0425
[考研] 22408 352分求调剂 +4 努力的夏末 2026-04-09 4/200 2026-04-11 10:42 by maddjdld
[考研] 生物学调剂 可调剂到生物与医药 +8 李政莹 2026-04-06 9/450 2026-04-11 10:36 by wwj2530616
[考研] 297求调剂 +9 Kwgyz 2026-04-09 9/450 2026-04-11 10:09 by zhq0425
[考研] 22408 327分求调剂 +4 韵风kon 2026-04-10 4/200 2026-04-11 09:51 by 猪会飞
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 22:23 by 286640313
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +8 求上岸的小王 2026-04-10 8/400 2026-04-10 15:09 by hemengdong
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 一志愿哈工大，初试329，求环境科学与工程调剂！ +11 余未辛 2026-04-06 11/550 2026-04-08 15:21 by screening
[考研] 265求调剂 +19 小木虫085600 2026-04-06 21/1050 2026-04-08 10:38 by 逆水乘风
[考研] 326分，一志愿沪9，求生物学调剂 +4 刘墨墨 2026-04-05 4/200 2026-04-08 06:22 by lijunpoly
[考研] 求调剂 +15 熊二想上岸 2026-04-06 15/750 2026-04-08 04:53 by 无际的草原
[考研] 调剂求助（生物与医药） +6 @6952 2026-04-06 6/300 2026-04-07 23:52 by lys0704
[考研] 322求调剂 +3 嗯哼哼恒 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:52 by nepu_uu
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-05 5/250 2026-04-05 17:38 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭