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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取RNA时 用DEPC水溶解，条件是什么，要多长时间呢
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取RNA时 用DEPC水溶解，条件是什么，要多长时间呢 已有1人参与

提取RNA,用DEPC融多长时间，是放在冰盒上融还是在室温啊
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1楼 2012-04-28 09:16:23
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wushuwei1104

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-12 15:59:30
引用回帖:
8楼: Originally posted by stewart3261 at 2012-09-12 09:47:14
十分感谢！然后我想问一下，这两种有什么区别吗？或者只用DEPC有什么影响呢？...

首先DEPC是一种RNA酶抑制剂，它会抑制RNA降解，因此它也有很强的毒性（呼吸道致癌），因此在操作的时候一定要带上防毒面具。其次，DEPC是一种脂溶性物质，它很难溶于水，因此要搅拌过夜，使之充分溶解。而RNA它是溶于水的，RNA不溶于DEPC。最后，正是因为平常的超纯水或是蒸馏水中都有RNA酶，如果用他们直接溶解RNA，提取的RNA势必会降解，因此我们要先用DEPC除去水中的RNA酶，用经处理的不含RNA酶的水去溶解提取出的RNA。   一句话，DEPC是除去RNA酶的，而不是溶解RNA的！  楼主是学分子生物学的吗？如果不是的话，要多学习学习了。
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勤能补拙
9楼2012-09-12 12:40:08
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by stewart3261 at 2012-09-14 09:05:10
因为有师姐说，在处理水时有可能加重RNA的降解！所以就直接用DEPC水来溶解RNA！还有一个问题，RNA吸光度比值测定时用TE或者DEPC水稀释时也是用水处理过的1%浓度吗？请问一下，您是用的什么稀释的？TE？DEPC?...

我们使用DEPC处理过的水测得，空白用的是DEPC处理过的水，样品是DEPC处理过的水溶解的RNA。
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勤能补拙
14楼2012-09-14 09:50:47
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cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-28 10:22:25
室温就行，因为你前一步是洗涤，用75%的酒精，用DEPC溶解时要保证酒精尽可能的挥发干净，不然PCR效果不好，RNA非常好溶，加上水就好了，所以你完全不必在冰上等，加上水后立即-80保存就好了
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我努力我奋斗我成功
2楼2012-04-28 09:35:14
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-04-28 09:35:14:
室温就行，因为你前一步是洗涤，用75%的酒精，用DEPC溶解时要保证酒精尽可能的挥发干净，不然PCR效果不好，RNA非常好溶，加上水就好了，所以你完全不必在冰上等，加上水后立即-80保存就好了

嗯嗯 那我加多少DEPC溶解呢，50微DEPC溶解，浓度会不会太小
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3楼2012-05-04 10:58:49
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by 桐苇铅铅 at 2012-05-04 10:58:49:
嗯嗯 那我加多少DEPC溶解呢，50微DEPC溶解，浓度会不会太小

在提取RNA的时候最后一步，等晾干后直接溶在RNAfree水（DEPC处理过的水）中就可以，我们这边做一般溶在20-25微升DEPC处理过的水中即可，如果水太多  可能导致RNA浓度过低，电泳检测不清楚的问题。就这些，呵呵，祝君好运！！
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勤能补拙
4楼2012-05-04 12:45:14
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-04 12:45:14:
在提取RNA的时候最后一步，等晾干后直接溶在RNAfree水（DEPC处理过的水）中就可以，我们这边做一般溶在20-25微升DEPC处理过的水中即可，如果水太多  可能导致RNA浓度过低，电泳检测不清楚的问题。就这些，呵呵， ...

加上一句，室温晾干即可，时间大约2-3分钟，时间太长可能导致RNA降解！
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勤能补拙
5楼2012-05-04 12:46:05
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stewart3261

铜虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-04 12:45:14
在提取RNA的时候最后一步，等晾干后直接溶在RNAfree水（DEPC处理过的水）中就可以，我们这边做一般溶在20-25微升DEPC处理过的水中即可，如果水太多  可能导致RNA浓度过低，电泳检测不清楚的问题。就这些，呵呵，祝 ...

你好，我想问一下DEPC处理的水是按什么比例配制的？直接用DEPC水溶解RNA可以吗？
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6楼2012-09-10 20:10:12
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by stewart3261 at 2012-09-10 20:10:12
你好，我想问一下DEPC处理的水是按什么比例配制的？直接用DEPC水溶解RNA可以吗？...

直接用DEPC肯定不行呀！ DEPC处理的水配制方法：按1:1000的比例配置（1毫升DEPC溶解在1000毫升超纯水中）搅拌过夜，120℃高温灭菌40分钟，得到的水是DEPC处理过的水（RNAase free）的水。用这个水溶解提取的RNA。
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勤能补拙
7楼2012-09-11 10:35:49
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stewart3261

铜虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-09-11 10:35:49
直接用DEPC肯定不行呀！ DEPC处理的水配制方法：按1:1000的比例配置（1毫升DEPC溶解在1000毫升超纯水中）搅拌过夜，120℃高温灭菌40分钟，得到的水是DEPC处理过的水（RNAase free）的水。用这个水溶解提取的RNA。: ...

十分感谢！然后我想问一下，这两种有什么区别吗？或者只用DEPC有什么影响呢？
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8楼2012-09-12 09:47:14
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stewart3261

铜虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-09-12 12:40:08
首先DEPC是一种RNA酶抑制剂，它会抑制RNA降解，因此它也有很强的毒性（呼吸道致癌），因此在操作的时候一定要带上防毒面具。其次，DEPC是一种脂溶性物质，它很难溶于水，因此要搅拌过夜，使之充分溶解。而RNA它是溶 ...

谢谢，学习了！
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10楼2012-09-13 10:20:46
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