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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取RNA时 用DEPC水溶解,条件是什么,要多长时间呢已有1人参与

提取RNA,用DEPC融多长时间,是放在冰盒上融还是在室温啊
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-12 15:59:30
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8楼: Originally posted by stewart3261 at 2012-09-12 09:47:14
十分感谢!然后我想问一下,这两种有什么区别吗?或者只用DEPC有什么影响呢?...

首先DEPC是一种RNA酶抑制剂,它会抑制RNA降解,因此它也有很强的毒性(呼吸道致癌),因此在操作的时候一定要带上防毒面具。其次,DEPC是一种脂溶性物质,它很难溶于水,因此要搅拌过夜,使之充分溶解。而RNA它是溶于水的,RNA不溶于DEPC。最后,正是因为平常的超纯水或是蒸馏水中都有RNA酶,如果用他们直接溶解RNA,提取的RNA势必会降解,因此我们要先用DEPC除去水中的RNA酶,用经处理的不含RNA酶的水去溶解提取出的RNA。   一句话,DEPC是除去RNA酶的,而不是溶解RNA的!  楼主是学分子生物学的吗?如果不是的话,要多学习学习了。
勤能补拙
9楼2012-09-12 12:40:08
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by stewart3261 at 2012-09-14 09:05:10
因为有师姐说,在处理水时有可能加重RNA的降解!所以就直接用DEPC水来溶解RNA!还有一个问题,RNA吸光度比值测定时用TE或者DEPC水稀释时也是用水处理过的1%浓度吗?请问一下,您是用的什么稀释的?TE?DEPC?...

我们使用DEPC处理过的水测得,空白用的是DEPC处理过的水,样品是DEPC处理过的水溶解的RNA。
勤能补拙
14楼2012-09-14 09:50:47
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cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-28 10:22:25
室温就行,因为你前一步是洗涤,用75%的酒精,用DEPC溶解时要保证酒精尽可能的挥发干净,不然PCR效果不好,RNA非常好溶,加上水就好了,所以你完全不必在冰上等,加上水后立即-80保存就好了
我努力我奋斗我成功
2楼2012-04-28 09:35:14
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-04-28 09:35:14:
室温就行,因为你前一步是洗涤,用75%的酒精,用DEPC溶解时要保证酒精尽可能的挥发干净,不然PCR效果不好,RNA非常好溶,加上水就好了,所以你完全不必在冰上等,加上水后立即-80保存就好了

嗯嗯 那我加多少DEPC溶解呢,50微DEPC溶解,浓度会不会太小
3楼2012-05-04 10:58:49
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 桐苇铅铅 at 2012-05-04 10:58:49:
嗯嗯 那我加多少DEPC溶解呢,50微DEPC溶解,浓度会不会太小

在提取RNA的时候最后一步,等晾干后直接溶在RNAfree水(DEPC处理过的水)中就可以,我们这边做一般溶在20-25微升DEPC处理过的水中即可,如果水太多  可能导致RNA浓度过低,电泳检测不清楚的问题。就这些,呵呵,祝君好运!!
勤能补拙
4楼2012-05-04 12:45:14
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-04 12:45:14:
在提取RNA的时候最后一步,等晾干后直接溶在RNAfree水(DEPC处理过的水)中就可以,我们这边做一般溶在20-25微升DEPC处理过的水中即可,如果水太多  可能导致RNA浓度过低,电泳检测不清楚的问题。就这些,呵呵, ...

加上一句,室温晾干即可,时间大约2-3分钟,时间太长可能导致RNA降解!
勤能补拙
5楼2012-05-04 12:46:05
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stewart3261

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-04 12:45:14
在提取RNA的时候最后一步,等晾干后直接溶在RNAfree水(DEPC处理过的水)中就可以,我们这边做一般溶在20-25微升DEPC处理过的水中即可,如果水太多  可能导致RNA浓度过低,电泳检测不清楚的问题。就这些,呵呵,祝 ...

你好,我想问一下DEPC处理的水是按什么比例配制的?直接用DEPC水溶解RNA可以吗?
6楼2012-09-10 20:10:12
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by stewart3261 at 2012-09-10 20:10:12
你好,我想问一下DEPC处理的水是按什么比例配制的?直接用DEPC水溶解RNA可以吗?...

直接用DEPC肯定不行呀! DEPC处理的水配制方法:按1:1000的比例配置(1毫升DEPC溶解在1000毫升超纯水中)搅拌过夜,120℃高温灭菌40分钟,得到的水是DEPC处理过的水(RNAase free)的水。用这个水溶解提取的RNA。
勤能补拙
7楼2012-09-11 10:35:49
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stewart3261

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-09-11 10:35:49
直接用DEPC肯定不行呀! DEPC处理的水配制方法:按1:1000的比例配置(1毫升DEPC溶解在1000毫升超纯水中)搅拌过夜,120℃高温灭菌40分钟,得到的水是DEPC处理过的水(RNAase free)的水。用这个水溶解提取的RNA。: ...

十分感谢!然后我想问一下,这两种有什么区别吗?或者只用DEPC有什么影响呢?
8楼2012-09-12 09:47:14
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stewart3261

铜虫 (小有名气)

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9楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-09-12 12:40:08
首先DEPC是一种RNA酶抑制剂,它会抑制RNA降解,因此它也有很强的毒性(呼吸道致癌),因此在操作的时候一定要带上防毒面具。其次,DEPC是一种脂溶性物质,它很难溶于水,因此要搅拌过夜,使之充分溶解。而RNA它是溶 ...

谢谢,学习了!
10楼2012-09-13 10:20:46
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