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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 环境微生物RNA提取
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snowfling

新虫 (初入文坛)

[交流] 环境微生物RNA提取 已有5人参与

最近在提环境水体的RNA，采样方法为将水体微生物过在滤膜上，然后放在RNA later中进行保存。
提取过程使用了试剂盒和Trizol手工的方法，但是都出现了问题。

使用试剂盒时，在裂解液加乙醇溶解上柱的过程中出现了裂解液加乙醇分层的现象，感觉出现油状物分层。

使用Trizol提取的时候，将滤膜放在Trizol中裂解，裂解完离心，之后Trizol就分为了两层。现象如图所示~~

初步问了很多人，大家都是是RNA later溶液导致的这种现象
然后RNA就一直提不出来。

不知道大家提RNA的时候有没有遇到这种问题呢？出现之后提取效率会变低么？有没有什么好的解决方法呢？

环境微生物RNA提取
IMG_1219.JPG
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1楼 2015-06-05 15:12:05
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chenfeng0823

新虫 (初入文坛)
★
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RNA Later中的各种离子浓度很高，建议离心前加一些水再离。
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2楼2015-07-24 11:09:57
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lenalee119

铜虫 (初入文坛)
★
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我也是从环境水体中提取RNA，也是先过滤在滤膜上然后提取。由于RNAlater会影响后续到RNA抽提，所以我有邮件问过TAKARA公司和 life technologies的人，都回复说建议先除去RNAlater后再进行RNA抽提。我最后的处理办法是每张滤膜上RNAlater只加20-50微升，这个量足以不使RNA分解，而又不会影响后续的试剂盒抽提或手工抽提（使用TAKARA公司的RNA试剂盒或和光制药的ISOGEN进行手工抽提都可以有效提取总RNA）。
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3楼2015-09-16 13:49:47
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ypan

木虫 (著名写手)
★
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用MP公司的试剂盒试一试
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4楼2015-09-28 15:00:09
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ChenYFSCAU

铜虫 (初入文坛)
★
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我采用了qiagen的RNA protector提取革兰氏阴性菌的RNA，后续采用qiagenRNA提取试剂盒，提取到的细菌总RNA有降解，也是提了好多次都有降解，但是，不加protector之后抽提的RNA就没有降解现象了。
后面我就不加这个protector了，快速提取RNA之后赶紧进行反转录成cDNA。
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5楼2015-11-22 16:15:12
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libosa

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by ChenYFSCAU at 2015-11-22 16:15:12
我采用了qiagen的RNA protector提取革兰氏阴性菌的RNA，后续采用qiagenRNA提取试剂盒，提取到的细菌总RNA有降解，也是提了好多次都有降解，但是，不加protector之后抽提的RNA就没有降解现象了。
后面我就不加这个p ...

是不是那个reagent

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6楼2017-01-02 23:05:22
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