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qiu3260442金虫 (小有名气)
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[求助]
pet28诱导产生蛋白是包涵体，要纯化蛋白 已有3人参与
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| pet28诱导产生蛋白是包涵体，要纯化蛋白，可以不破碎细胞，直接用含有8M尿素的pbs裂解得到目的蛋白吗 |
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 蛋白表达纯化与检测 |
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恶魔的左眼
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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qiu3260442: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-06-19 21:41:29
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qiu3260442: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-06-19 21:41:29
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怎么可能。。。不超声破碎，你怎么洗蛋白也出不来啊。。。包涵体不可怕，做个蛋白复性就好了。 包涵体复性 （1）将溶解的包涵体装入已经处理好的透析袋中，封好口，。 （2）放于4℃复性缓冲液中进行梯度复性，间隔时间为10-12h，复性缓冲液的浓度分别为：4.5mmol/L、3.5mmol/L、2.5mmol/L、1.5mmol/L、0.5mmol/L、0mmol/L。 （3）取出复性后的蛋白溶液12000rpm离心20min，取上清，分别取少量的上清和少许的沉淀进行SDS-PAGE，检测复性情况。 复性缓冲液：PBS 1mmol/LEDTA +尿素 |
3楼2015-06-03 11:21:41
2楼2015-06-03 10:33:05
mataomatao
禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
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4楼2015-06-03 20:05:25
