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qiu3260442

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[求助] pet28诱导产生蛋白是包涵体，要纯化蛋白已有3人参与

pet28诱导产生蛋白是包涵体，要纯化蛋白，可以不破碎细胞，直接用含有8M尿素的pbs裂解得到目的蛋白吗

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蛋白表达纯化与检测

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1楼 2015-06-02 16:37:13

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lha123

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

楼主采用的是大肠杆菌体系吧，包涵体存在细胞内，不裂解细胞怎么能获得包涵体呢。至于你说的采用8M尿素的pbs能够裂解细胞吗？及时能，在8M的Urea的变性作用下很多蛋白都溶解了包括包涵体，楼主应该考虑蛋白纯度吧，个人之见，呵呵

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加油！2015

2楼2015-06-03 10:33:05

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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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qiu3260442: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-06-19 21:41:29

怎么可能。。。不超声破碎，你怎么洗蛋白也出不来啊。。。包涵体不可怕，做个蛋白复性就好了。
包涵体复性
（1）将溶解的包涵体装入已经处理好的透析袋中，封好口，。
（2）放于4℃复性缓冲液中进行梯度复性，间隔时间为10-12h，复性缓冲液的浓度分别为：4.5mmol/L、3.5mmol/L、2.5mmol/L、1.5mmol/L、0.5mmol/L、0mmol/L。
（3）取出复性后的蛋白溶液12000rpm离心20min，取上清，分别取少量的上清和少许的沉淀进行SDS-PAGE，检测复性情况。
复性缓冲液：PBS 1mmol/LEDTA +尿素

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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！

3楼2015-06-03 11:21:41

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