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lilyll

新虫 (初入文坛)

[求助] 怎么防止RNA降解? 已有3人参与

用trizol提取细胞的RNA,RNA降解的太厉害,各位大神有什么方法来降低它的降解啊?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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kongzi183

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我提过动物的。是在细胞间工作台里操作。用的东西也没有经过DEPC处理,因为都是新的,像枪头什么的,都直接灭菌拿来用。效果不错。戴口罩,勤换手套。你要没超净台就找个人少的地方。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-06-02 01:02:31
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lilyll

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kongzi183 at 2015-06-02 01:02:31
我提过动物的。是在细胞间工作台里操作。用的东西也没有经过DEPC处理,因为都是新的,像枪头什么的,都直接灭菌拿来用。效果不错。戴口罩,勤换手套。你要没超净台就找个人少的地方。
...

那你跑胶可以跑出18s,28s,5s这些条带吗?我跑的胶条带到是有,可是亮的太不正常了。。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-06-02 08:13:50
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kongzi183

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by lilyll at 2015-06-02 08:13:50
那你跑胶可以跑出18s,28s,5s这些条带吗?我跑的胶条带到是有,可是亮的太不正常了。。。。
...

没有跑这些。跑的actin。挺好的

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-06-02 09:34:01
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
从提取RNA一开始就选择性的使用RNase的蛋白质变性试剂(如酚、氯仿等有机溶剂以及强烈的胍类变性剂)、蛋白水解酶(如蛋白酶K)和能够与蛋白质结合阴离子去污剂(比如SDS、脱氧胆酸等),并且联合使用RNase的特异性抑制剂(比如RNasin、DEPC等),能最大限度地防止能源性RNase对于RNA的降解。另外,在变性液中加入Beta 巯基乙醇,DTT等还原剂也可以破坏RNase的二硫键,有利于RNase的变性、水解和灭活。
5楼2015-06-02 12:18:14
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Merrylegs

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
环境清洁,器材用DEPC处理或直接购买处理后的,勤换手套。
6楼2015-06-02 16:35:38
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