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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 怎么防止RNA降解？
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lilyll

新虫 (初入文坛)

[求助] 怎么防止RNA降解？ 已有3人参与

用trizol提取细胞的RNA,RNA降解的太厉害，各位大神有什么方法来降低它的降解啊？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-06-01 17:07:02
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kongzi183

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我提过动物的。是在细胞间工作台里操作。用的东西也没有经过DEPC处理，因为都是新的，像枪头什么的，都直接灭菌拿来用。效果不错。戴口罩，勤换手套。你要没超净台就找个人少的地方。

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2楼2015-06-02 01:02:31
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lilyll

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kongzi183 at 2015-06-02 01:02:31
我提过动物的。是在细胞间工作台里操作。用的东西也没有经过DEPC处理，因为都是新的，像枪头什么的，都直接灭菌拿来用。效果不错。戴口罩，勤换手套。你要没超净台就找个人少的地方。
...

那你跑胶可以跑出18s,28s,5s这些条带吗？我跑的胶条带到是有，可是亮的太不正常了。。。。

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3楼2015-06-02 08:13:50
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kongzi183

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by lilyll at 2015-06-02 08:13:50
那你跑胶可以跑出18s,28s,5s这些条带吗？我跑的胶条带到是有，可是亮的太不正常了。。。。
...

没有跑这些。跑的actin。挺好的

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4楼2015-06-02 09:34:01
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从提取RNA一开始就选择性的使用RNase的蛋白质变性试剂（如酚、氯仿等有机溶剂以及强烈的胍类变性剂）、蛋白水解酶（如蛋白酶K）和能够与蛋白质结合阴离子去污剂（比如SDS、脱氧胆酸等），并且联合使用RNase的特异性抑制剂（比如RNasin、DEPC等），能最大限度地防止能源性RNase对于RNA的降解。另外，在变性液中加入Beta 巯基乙醇，DTT等还原剂也可以破坏RNase的二硫键，有利于RNase的变性、水解和灭活。
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5楼2015-06-02 12:18:14
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Merrylegs

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
环境清洁，器材用DEPC处理或直接购买处理后的，勤换手套。
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6楼2015-06-02 16:35:38
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