应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 大肠杆菌阴性对照
41/1返回列表
查看: 1406  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

chenyanzhen

铁虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌阴性对照 已有2人参与

之前用以下这对引物扩增大肠杆菌（DH5A,BL21，EAEC,EHEC,EIEC,EPEC,ETEC）,都没有扩增信号，但是我在NCBI上能搜到相应的扩增序列
AACTATTGGGTTTACCGCG
ACCAATTGCTGGAGCATAATCT
后来换成另一对,在NCBI上没搜到相应的扩增序列，但7种模板全部都有扩增信号，连6管阴性（加水）都有。阴性Ct值还很靠前，有想过是聚合酶中的DNA残留，但不知要怎么验证。
TGGGATCTGCCATTGTCAGA
CACTGGTGTGGCCATAATTC
哪位高手帮帮忙？

大肠杆菌阴性对照
1.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
活在当下，充实自己
1楼 2015-06-01 09:18:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先用琼脂糖凝胶电泳检测下，看看是否阴性对照也是有的。
赞一下 回复此楼
2楼2015-06-01 14:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

07bio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 先跑电泳看下是否有目的条带，确定真的是PCR扩增出来的。
2. 如果电泳有目的条带，要先怀疑是否是污染引起的，毕竟你阴性对照都有信号。以我的经验，DNA聚合酶残留的DNA不足以引起扩增信号。
赞一下 回复此楼
3楼2015-06-01 16:41:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenyanzhen

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 07bio at 2015-06-01 16:41:34
1. 先跑电泳看下是否有目的条带，确定真的是PCR扩增出来的。
2. 如果电泳有目的条带，要先怀疑是否是污染引起的，毕竟你阴性对照都有信号。以我的经验，DNA聚合酶残留的DNA不足以引起扩增信号。

情况已经跟领导讨论过了，阴性应该就是酶中的残留DNA引起的。
赞一下 回复此楼
活在当下，充实自己
4楼2015-06-01 17:54:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chenyanzhen 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:03 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 09:13 by xSrQNSSjcgoX
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 SX5mJmPWDfOO 2026-11-13 3/150 2026-11-15 08:07 by xSrQNSSjcgoX
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 XJXMuRjD7cK7 2026-11-13 3/150 2026-11-15 05:33 by xSrQNSSjcgoX
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 8/400 2026-11-15 02:26 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 10/500 2026-11-15 00:39 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-13 11:37 by Equinoxhua
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1Nb0IVlmV6v0 2026-11-11 4/200 2026-11-13 11:18 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-13 11:13 by Equinoxhua
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:51 by ECLTXnJnRSXf
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:48 by ECLTXnJnRSXf
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-11 5/250 2026-11-12 11:44 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 5/250 2026-11-12 11:14 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 8/400 2026-11-12 10:27 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 9/450 2026-11-12 09:24 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 08:15 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 8/400 2026-11-12 04:57 by 9fOTqj074tIg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭