24小时热门版块排行榜    

查看: 1323  |  回复: 3

chenyanzhen

铁虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌阴性对照 已有2人参与

之前用以下这对引物扩增大肠杆菌(DH5A,BL21,EAEC,EHEC,EIEC,EPEC,ETEC),都没有扩增信号,但是我在NCBI上能搜到相应的扩增序列
AACTATTGGGTTTACCGCG
ACCAATTGCTGGAGCATAATCT
后来换成另一对,在NCBI上没搜到相应的扩增序列,但7种模板全部都有扩增信号,连6管阴性(加水)都有。阴性Ct值还很靠前,有想过是聚合酶中的DNA残留,但不知要怎么验证。
TGGGATCTGCCATTGTCAGA
CACTGGTGTGGCCATAATTC
哪位高手帮帮忙?

大肠杆菌阴性对照
1.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

活在当下,充实自己
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先用琼脂糖凝胶电泳检测下,看看是否阴性对照也是有的。
2楼2015-06-01 14:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

07bio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 先跑电泳看下是否有目的条带,确定真的是PCR扩增出来的。
2. 如果电泳有目的条带,要先怀疑是否是污染引起的,毕竟你阴性对照都有信号。以我的经验,DNA聚合酶残留的DNA不足以引起扩增信号。
3楼2015-06-01 16:41:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenyanzhen

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 07bio at 2015-06-01 16:41:34
1. 先跑电泳看下是否有目的条带,确定真的是PCR扩增出来的。
2. 如果电泳有目的条带,要先怀疑是否是污染引起的,毕竟你阴性对照都有信号。以我的经验,DNA聚合酶残留的DNA不足以引起扩增信号。

情况已经跟领导讨论过了,阴性应该就是酶中的残留DNA引起的。
活在当下,充实自己
4楼2015-06-01 17:54:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chenyanzhen 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +9 且听虎啸 2026-08-07 12/600 2026-08-07 21:53 by 理想三旬2025
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见