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xiean

银虫 (小有名气)

[求助] 梯度洗脱,基线不平,怎么积分进行定量计算 已有2人参与

最近在做高纯度单宁酸的制备实验,产品出来了不知道怎么分析纯度,本想打个液相用面积归一法算算纯度,但得到的液相图谱没法积分,如下所示:
我用的流动相是 0.1%的磷酸水溶液和甲醇,梯度洗脱:前7分钟 20%的甲醇,7-9分钟变化到90%的甲醇,9-22分钟是90%甲醇,22分钟变为20%的甲醇,30分钟一个样,流速为1ml/min。
请教各位高手,如何改变色谱条件,使基线平。

梯度洗脱,基线不平,怎么积分进行定量计算
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stayhungry,stayfoolish!
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xiean

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by archbishop at 2015-05-27 12:06:40
因为你7-9分钟比例变了所以基线漂移了。比例变化太快,这样的梯度并不合理。调整一下时间和比例,减缓梯度变化。

7到9分钟,甲醇从20%增加到80%,两分钟时间太少了吗?
stayhungry,stayfoolish!
4楼2015-05-27 20:57:37
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

因为你7-9分钟比例变了所以基线漂移了。比例变化太快,这样的梯度并不合理。调整一下时间和比例,减缓梯度变化。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
2楼2015-05-27 12:06:40
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呀呀好傻

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这个没法算了 必须重跑了
父母在人生尚有来处父母走人生只剩归途
3楼2015-05-27 16:14:59
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

引用回帖:
4楼: Originally posted by xiean at 2015-05-27 20:57:37
7到9分钟,甲醇从20%增加到80%,两分钟时间太少了吗?...

是啊,从图上看这一点太明显了。无法积分的原因有两个:
1. 梯度太急促,在流动相比例变化之后迅速出峰。
2. 梯度的时间2min,而HPLC的峰峰宽差不多都在1-2min,你这个峰也不例外。
结果就是峰起始和结束的吸收值相差太大。
另外,你的系统死体积太大了。7分钟比例开始变化,一直到12和13分钟之间基线才抬升,这一点也和溶剂峰的出峰吻合。
给你个例子:
0-2min,20%甲醇等度,2-10min,20%-80%甲醇,后面恢复比例平衡即可。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
5楼2015-05-27 21:23:15
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