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东篱小菊

铁虫 (小有名气)

[求助] 测定酱油中山梨酸苯甲酸梯度洗脱遇到的问题,请斑竹不要删除,在线等,挺急的~~~~~

实验室做测定酱油中山梨酸,苯甲酸含量的实验,用的仪器是watersE2695,分别用watersDC18   粒径3um的柱子,和waters  T3,粒径5um柱子做,出现了各种各样的问题,望大神们能帮助解答
  

首先说一下用waters  T3,粒径5um柱子做遇到的问题,流动相是20mmol乙酸铵,甲醇(进口,质量有保障)我进的是10ppm,20ppm,50ppm,100ppm的山梨酸,苯甲酸和糖精钠的混标,三个峰完全分离,峰形也比较好,但是唯一的不足就是峰有点宽,苯甲酸是0.8min。糖精钠0-9min,山梨酸最宽,是1.1min,有人建议把梯度洗脱时甲醇的的含量增大点,各位说说可行么?


watersDC18   粒径3um的柱子做的峰的宽度很小,在0.4min-----0.6min,不足点是在苯甲酸前面有一个鼓包,确定标准品流动相没有受污染,这个鼓包高度20mAu,浓度高的基本看不出来,但是10ppm标准样非常明显,是梯度峰么,具体什么原因请大神解答
上图第一图是用waters  waters  T3,粒径5um柱子的梯度,A是20mmol乙酸铵,B是甲醇

第二三四五图分别是用waters  waters  T3,粒径5um柱子做的10ppm,20ppm,50ppm,100ppm做的山梨酸、苯甲酸、糖精钠混标


第六图用watersDC18   粒径3um的柱子的梯度,A是20mmol乙酸铵,B是甲醇
第七八九十图分别是用watersDC18   粒径3um的柱子做的10ppm,20ppm,50ppm,100ppm做的山梨酸、苯甲酸、糖精钠混标



最后一个图是两个柱子做10ppm混标的比较结果,蓝色是watersDC18   粒径3um的柱子做的,黑色是waters  waters  T3,粒径5um柱子做的





另:恳求版主不要删我帖子,前面发的帖子都是因为忘记传图片,又不能修改,下边回复也没办法传图片,只能再发帖了,版主手下留情

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archbishop

禁虫 (职业作家)

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1. 梯度太缓了
2. 开始的等度部分太长,一分钟就够了
3. 流速0.8太慢了,1.0最好
4. 鼓包应该不是标准品带入的,流动相不好说,改变梯度观察是否变化。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
2楼2015-01-16 21:16:28
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东篱小菊

铁虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by archbishop at 2015-01-16 21:16:28
1. 梯度太缓了
2. 开始的等度部分太长,一分钟就够了
3. 流速0.8太慢了,1.0最好
4. 鼓包应该不是标准品带入的,流动相不好说,改变梯度观察是否变化。

1、梯度太缓是什么意思?是流动相中乙酸铵和甲醇的比例整个变化范围太窄?还是梯度随时间变化太慢????
2、开始时间有点长,已经在改进,不知道下个峰会是什么样子
3、 waters  T3做的是0.8的,试过1.0的,峰会更宽,另外T3柱子名字叫atlantics  T3,是waters公司的,发帖时有点着急
4、我这里是用两根柱子做的,都有问题,麻烦您能不能再仔细看看,我就是一学徒,师傅不在,师傅等着周一回来拿结果,我很急~~~~麻烦您了
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3楼2015-01-16 21:30:59
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archbishop

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3楼: Originally posted by 东篱小菊 at 2015-01-16 21:30:59
1、梯度太缓是什么意思?是流动相中乙酸铵和甲醇的比例整个变化范围太窄?还是梯度随时间变化太慢????
2、开始时间有点长,已经在改进,不知道下个峰会是什么样子
3、 waters  T3做的是0.8的,试过1.0的,峰 ...

1. 你提高一下甲醇的比例,从10%到60%,自然随时间变化就快了
2. 流速就用1.0,流速越快峰越宽这不是正常现象,不是流速的原因。T3我用过。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
4楼2015-01-16 21:50:37
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东篱小菊

铁虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by archbishop at 2015-01-16 21:50:37
1. 你提高一下甲醇的比例,从10%到60%,自然随时间变化就快了
2. 流速就用1.0,流速越快峰越宽这不是正常现象,不是流速的原因。T3我用过。...

1、谢谢指导,甲醇比例用的小的原因主要是分析的酱油前几分钟杂峰太多,所以把甲醇比例降低让他们延后出峰,并且糖精钠随着甲醇的比例增多保留时间变化比较快,容易跟山梨酸和苯甲酸的峰重叠

2、我会听从你的建议,适当把洗脱时甲醇比例增大,

3、应该是我只走了一次,偶然因素造成的,我会多走几次1.0的
4、你是版主????好敬业哦,,第一次发专业问题竟然是版主回答的,激动,兴奋、谢谢这么晚还帮我答疑
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5楼2015-01-16 22:23:45
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archbishop

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5楼: Originally posted by 东篱小菊 at 2015-01-16 22:23:45
1、谢谢指导,甲醇比例用的小的原因主要是分析的酱油前几分钟杂峰太多,所以把甲醇比例降低让他们延后出峰,并且糖精钠随着甲醇的比例增多保留时间变化比较快,容易跟山梨酸和苯甲酸的峰重叠

2、我会听从你 ...

1. 你这图里前面并没有杂峰啊。
2. 你的梯度部分可以延长时间,前面我疏忽了,从4.8到5.2只有0.4min,这样即使甲醇的比例只变化了百分之几,算下来平均每分钟比例变化要超过百分之十。建议你采用比如2min-15min,甲醇10%-50%,这样放缓梯度,增加时间和比例变化的幅度,可以使峰更尖锐,也会避免峰走到一起发生干扰。

你过奖了,我其实常常回帖的。
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6楼2015-01-16 22:41:14
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东篱小菊

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6楼: Originally posted by archbishop at 2015-01-16 22:41:14
1. 你这图里前面并没有杂峰啊。
2. 你的梯度部分可以延长时间,前面我疏忽了,从4.8到5.2只有0.4min,这样即使甲醇的比例只变化了百分之几,算下来平均每分钟比例变化要超过百分之十。建议你采用比如2min-15min, ...

已经找到原因了,原先我还不确定到底是不是梯度变化引起的基线变化,现在完全确定了,我刚才把几个浓度的标准曲线放到一起比较,没想到基线完全重合,也就证明10ppm标曲苯甲酸前面的小鼓包是流动相的峰了,只是因为10ppm太小了,衬托的基线变化比较快了。减去空白对定量是没有影响的
只可惜不能再上图了

这些图是标准曲线,样品谱图太复杂,为了方便回答问题的人看也就没有放上来

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7楼2015-01-16 23:52:48
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东篱小菊

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6楼: Originally posted by archbishop at 2015-01-16 22:41:14
1. 你这图里前面并没有杂峰啊。
2. 你的梯度部分可以延长时间,前面我疏忽了,从4.8到5.2只有0.4min,这样即使甲醇的比例只变化了百分之几,算下来平均每分钟比例变化要超过百分之十。建议你采用比如2min-15min, ...

我按你说的再重新走一下梯度,师傅回来了就好交差了,开心,开心

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8楼2015-01-16 23:54:07
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