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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 测定酱油中山梨酸苯甲酸梯度洗脱遇到的问题，请斑竹不要删除，在线等，挺急的~~~~~
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东篱小菊

铁虫 (小有名气)

[求助] 测定酱油中山梨酸苯甲酸梯度洗脱遇到的问题，请斑竹不要删除，在线等，挺急的~~~~~

实验室做测定酱油中山梨酸，苯甲酸含量的实验，用的仪器是watersE2695，分别用watersDC18   粒径3um的柱子，和waters  T3,粒径5um柱子做，出现了各种各样的问题，望大神们能帮助解答
  

首先说一下用waters  T3,粒径5um柱子做遇到的问题，流动相是20mmol乙酸铵，甲醇（进口，质量有保障）我进的是10ppm，20ppm，50ppm，100ppm的山梨酸，苯甲酸和糖精钠的混标，三个峰完全分离，峰形也比较好，但是唯一的不足就是峰有点宽，苯甲酸是0.8min。糖精钠0-9min，山梨酸最宽，是1.1min，有人建议把梯度洗脱时甲醇的的含量增大点，各位说说可行么？


watersDC18   粒径3um的柱子做的峰的宽度很小，在0.4min-----0.6min,不足点是在苯甲酸前面有一个鼓包，确定标准品流动相没有受污染，这个鼓包高度20mAu，浓度高的基本看不出来，但是10ppm标准样非常明显，是梯度峰么，具体什么原因请大神解答
上图第一图是用waters  waters  T3,粒径5um柱子的梯度，A是20mmol乙酸铵，B是甲醇

第二三四五图分别是用waters  waters  T3,粒径5um柱子做的10ppm，20ppm，50ppm，100ppm做的山梨酸、苯甲酸、糖精钠混标


第六图用watersDC18   粒径3um的柱子的梯度，A是20mmol乙酸铵，B是甲醇
第七八九十图分别是用watersDC18   粒径3um的柱子做的10ppm，20ppm，50ppm，100ppm做的山梨酸、苯甲酸、糖精钠混标



最后一个图是两个柱子做10ppm混标的比较结果，蓝色是watersDC18   粒径3um的柱子做的，黑色是waters  waters  T3,粒径5um柱子做的





另：恳求版主不要删我帖子，前面发的帖子都是因为忘记传图片，又不能修改，下边回复也没办法传图片，只能再发帖了，版主手下留情

测定酱油中山梨酸苯甲酸梯度洗脱遇到的问题，请斑竹不要删除，在线等，挺急的~~~~~
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淡定，淡定，淡定！
1楼 2015-01-16 21:05:19
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
1. 梯度太缓了
2. 开始的等度部分太长，一分钟就够了
3. 流速0.8太慢了，1.0最好
4. 鼓包应该不是标准品带入的，流动相不好说，改变梯度观察是否变化。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
2楼2015-01-16 21:16:28
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东篱小菊

铁虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by archbishop at 2015-01-16 21:16:28
1. 梯度太缓了
2. 开始的等度部分太长，一分钟就够了
3. 流速0.8太慢了，1.0最好
4. 鼓包应该不是标准品带入的，流动相不好说，改变梯度观察是否变化。

1、梯度太缓是什么意思？是流动相中乙酸铵和甲醇的比例整个变化范围太窄？还是梯度随时间变化太慢？？？？
2、开始时间有点长，已经在改进，不知道下个峰会是什么样子
3、 waters  T3做的是0.8的，试过1.0的，峰会更宽，另外T3柱子名字叫atlantics  T3，是waters公司的，发帖时有点着急
4、我这里是用两根柱子做的，都有问题，麻烦您能不能再仔细看看，我就是一学徒，师傅不在，师傅等着周一回来拿结果，我很急~~~~麻烦您了
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淡定，淡定，淡定！
3楼2015-01-16 21:30:59
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
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3楼: Originally posted by 东篱小菊 at 2015-01-16 21:30:59
1、梯度太缓是什么意思？是流动相中乙酸铵和甲醇的比例整个变化范围太窄？还是梯度随时间变化太慢？？？？
2、开始时间有点长，已经在改进，不知道下个峰会是什么样子
3、 waters  T3做的是0.8的，试过1.0的，峰 ...

1. 你提高一下甲醇的比例，从10%到60%，自然随时间变化就快了
2. 流速就用1.0，流速越快峰越宽这不是正常现象，不是流速的原因。T3我用过。
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4楼2015-01-16 21:50:37
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东篱小菊

铁虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by archbishop at 2015-01-16 21:50:37
1. 你提高一下甲醇的比例，从10%到60%，自然随时间变化就快了
2. 流速就用1.0，流速越快峰越宽这不是正常现象，不是流速的原因。T3我用过。...

1、谢谢指导，甲醇比例用的小的原因主要是分析的酱油前几分钟杂峰太多，所以把甲醇比例降低让他们延后出峰，并且糖精钠随着甲醇的比例增多保留时间变化比较快，容易跟山梨酸和苯甲酸的峰重叠

2、我会听从你的建议，适当把洗脱时甲醇比例增大，

3、应该是我只走了一次，偶然因素造成的，我会多走几次1.0的
4、你是版主？？？？好敬业哦，，第一次发专业问题竟然是版主回答的，激动，兴奋、谢谢这么晚还帮我答疑
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淡定，淡定，淡定！
5楼2015-01-16 22:23:45
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
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5楼: Originally posted by 东篱小菊 at 2015-01-16 22:23:45
1、谢谢指导，甲醇比例用的小的原因主要是分析的酱油前几分钟杂峰太多，所以把甲醇比例降低让他们延后出峰，并且糖精钠随着甲醇的比例增多保留时间变化比较快，容易跟山梨酸和苯甲酸的峰重叠

2、我会听从你 ...

1. 你这图里前面并没有杂峰啊。
2. 你的梯度部分可以延长时间，前面我疏忽了，从4.8到5.2只有0.4min，这样即使甲醇的比例只变化了百分之几，算下来平均每分钟比例变化要超过百分之十。建议你采用比如2min-15min，甲醇10%-50%，这样放缓梯度，增加时间和比例变化的幅度，可以使峰更尖锐，也会避免峰走到一起发生干扰。

你过奖了，我其实常常回帖的。
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6楼2015-01-16 22:41:14
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东篱小菊

铁虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by archbishop at 2015-01-16 22:41:14
1. 你这图里前面并没有杂峰啊。
2. 你的梯度部分可以延长时间，前面我疏忽了，从4.8到5.2只有0.4min，这样即使甲醇的比例只变化了百分之几，算下来平均每分钟比例变化要超过百分之十。建议你采用比如2min-15min， ...

已经找到原因了，原先我还不确定到底是不是梯度变化引起的基线变化，现在完全确定了，我刚才把几个浓度的标准曲线放到一起比较，没想到基线完全重合，也就证明10ppm标曲苯甲酸前面的小鼓包是流动相的峰了，只是因为10ppm太小了，衬托的基线变化比较快了。减去空白对定量是没有影响的
只可惜不能再上图了

这些图是标准曲线，样品谱图太复杂，为了方便回答问题的人看也就没有放上来

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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淡定，淡定，淡定！
7楼2015-01-16 23:52:48
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东篱小菊

铁虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by archbishop at 2015-01-16 22:41:14
1. 你这图里前面并没有杂峰啊。
2. 你的梯度部分可以延长时间，前面我疏忽了，从4.8到5.2只有0.4min，这样即使甲醇的比例只变化了百分之几，算下来平均每分钟比例变化要超过百分之十。建议你采用比如2min-15min， ...

我按你说的再重新走一下梯度，师傅回来了就好交差了，开心，开心

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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淡定，淡定，淡定！
8楼2015-01-16 23:54:07
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