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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 梯度洗脱，基线不平，怎么积分进行定量计算
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xiean

银虫 (小有名气)

[求助] 梯度洗脱，基线不平，怎么积分进行定量计算已有2人参与

最近在做高纯度单宁酸的制备实验，产品出来了不知道怎么分析纯度，本想打个液相用面积归一法算算纯度，但得到的液相图谱没法积分，如下所示：
我用的流动相是 0.1%的磷酸水溶液和甲醇，梯度洗脱：前7分钟 20%的甲醇，7-9分钟变化到90%的甲醇，9-22分钟是90%甲醇，22分钟变为20%的甲醇，30分钟一个样，流速为1ml/min。
请教各位高手，如何改变色谱条件，使基线平。

梯度洗脱，基线不平，怎么积分进行定量计算
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stayhungry，stayfoolish！
1楼2015-05-27 09:56:49
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
因为你7-9分钟比例变了所以基线漂移了。比例变化太快，这样的梯度并不合理。调整一下时间和比例，减缓梯度变化。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
2楼2015-05-27 12:06:40
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呀呀好傻

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这个没法算了 必须重跑了
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父母在人生尚有来处父母走人生只剩归途
3楼2015-05-27 16:14:59
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xiean

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by archbishop at 2015-05-27 12:06:40
因为你7-9分钟比例变了所以基线漂移了。比例变化太快，这样的梯度并不合理。调整一下时间和比例，减缓梯度变化。

7到9分钟，甲醇从20%增加到80%，两分钟时间太少了吗？
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stayhungry，stayfoolish！
4楼2015-05-27 20:57:37
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiean at 2015-05-27 20:57:37
7到9分钟，甲醇从20%增加到80%，两分钟时间太少了吗？...

是啊，从图上看这一点太明显了。无法积分的原因有两个：
1. 梯度太急促，在流动相比例变化之后迅速出峰。
2. 梯度的时间2min，而HPLC的峰峰宽差不多都在1-2min，你这个峰也不例外。
结果就是峰起始和结束的吸收值相差太大。
另外，你的系统死体积太大了。7分钟比例开始变化，一直到12和13分钟之间基线才抬升，这一点也和溶剂峰的出峰吻合。
给你个例子：
0-2min，20%甲醇等度，2-10min，20%-80%甲醇，后面恢复比例平衡即可。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
5楼2015-05-27 21:23:15
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
试试起始比例调到40%，10分钟到80%，维持5分钟，2分钟回到40%，维持5分钟。

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6楼2015-05-27 21:32:14
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