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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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1029016431

银虫 (小有名气)

[求助] 实验结果太奇怪了 已有4人参与

做的是一种植物的全长cDNA文库,文库建好后挑单克隆拿去测序,测序结果既不是插入片段序列,也不是质粒载体序列,确实大肠杆菌序列!邪门!哪位专业人士能给个合理解释吗?不胜感激!
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势必一飞
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1029016431

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yhz0626 at 2015-05-22 10:31:26
那会不会是转化过程出了问题,质粒没能导入感受态细胞里
...

如果质粒没转进入的话,大肠杆菌自身是无法在氯霉素环境中生长的,只有转进去的质粒上才有氯霉素抗性基因

[ 发自小木虫客户端 ]
势必一飞
7楼2015-05-22 13:15:00
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普鲁旺斯花季

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-05-20 09:00:43
应该是你的载体也没有转进大肠杆菌中,长的只是细菌,如果是抗性筛选的话,那可能是出现了耐受菌或者污染了
一生转而得一夏,当司掌好年华
2楼2015-05-19 23:40:55
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1029016431

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 普鲁旺斯花季 at 2015-05-19 23:40:55
应该是你的载体也没有转进大肠杆菌中,长的只是细菌,如果是抗性筛选的话,那可能是出现了耐受菌或者污染了

质粒载体有氯霉素抗性,请问倘若是被抗性株污染的话,在什么时候污染的才会把原来的插入片段序列掩盖呢?抗性株的数量在转化是应该还远没有非抗性株和插入片段多吧

[ 发自小木虫客户端 ]
势必一飞
3楼2015-05-20 08:21:30
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yhz0626

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒空载,但抗生素并没有筛选除去,假阳性,可以再加上蓝白斑筛选

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-05-20 23:33:37
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