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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 关于CCK-8结果异常，向各位大神求助
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xiaxuele8213

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于CCK-8结果异常，向各位大神求助 已有2人参与

本人应用药物干扰后测定肺腺癌细胞系A549、PC-9对于顺铂的药物敏感性，多次铺板实验，结果让人难以理解，PC-9对顺铂的浓度变化趋势明显，无明显异常.
A549多次实验，最高浓度为1000umol/L(0.3mg/ML)，加入CCK-8后发现最高浓度顺铂组抑制率为10~17%，根据既往文献，这个IC50也就是几十uM，这个真是太奇怪了，但是镜下看还是有变化的，细胞形态改变，没有了梭形外观，细胞数减少（图一），对照组正常（图二），可是为什么OD值没有趋势呢，难道这个细胞系是超级耐药？？？？
A549铺板密度为5000（8000也试过），铺板后24小时贴壁后，加入梯度的顺铂处理，24小时（48小时及72小时也试过）后加入10%体积的CCK-8，1-4小时测量OD值
求大神帮忙分析原因，求解决办法，不胜感激，因为小弟没有积分，所以没办法拿很多分给大家，希望大神帮忙！！！！

关于CCK-8结果异常，向各位大神求助
实验组.jpg


关于CCK-8结果异常，向各位大神求助-1
对照组.jpg
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1楼 2014-07-24 18:56:39
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华农夏田

铁虫 (正式写手)
实验组细胞飘了，怎么那么少的细胞？OD450应该有明显变化，请每次处理之前镜检细胞状态，结果会好的。
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要科研也要生活
2楼2014-07-24 20:08:21
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xiaxuele8213

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 华农夏田 at 2014-07-24 20:08:21
实验组细胞飘了，怎么那么少的细胞？OD450应该有明显变化，请每次处理之前镜检细胞状态，结果会好的。

已经多次进行实验，除了DDP，还测过培美曲塞，PC-9都有趋势，A549就是这么神奇，OD值（DDP浓度最大的）较对照组差异很小，真是搞不懂，急的要死呀
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3楼2014-07-24 20:23:35
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风信子寻梦

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请确认实验组和对照组的细胞个数状态一样！
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4楼2014-07-24 20:41:41
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xiaxuele8213

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 风信子寻梦 at 2014-07-24 20:41:41
请确认实验组和对照组的细胞个数状态一样！

铺板后镜下观察细胞个数及状态没有明显差异
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5楼2014-07-24 20:49:32
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毕业你好

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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6楼2014-07-25 08:56:00
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华农夏田

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaxuele8213 at 2014-07-24 20:23:35
已经多次进行实验，除了DDP，还测过培美曲塞，PC-9都有趋势，A549就是这么神奇，OD值（DDP浓度最大的）较对照组差异很小，真是搞不懂，急的要死呀...

哇塞，细胞数都不一致，OD得到的值差异小？CCK8是同仁的？96孔不行的话，用48或者24孔板便于观察，我就这么做的，供参考啦！OD值多少呢？不会跟空白对照一样吧？测之前先观察培养基偏砖红色，估计OD大于1，再测450。cck8很敏感滴！
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要科研也要生活
7楼2014-07-25 13:01:27
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猫的咖啡和书

新虫 (初入文坛)
求助楼主！PC9细胞平时生长呈什么形状？
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8楼2015-09-27 13:22:06
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