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fridayalicia

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 MTT！！！

俺第一次做MTT 出现了很囧的问题
HepG2细胞 设立 阴性对照、 梯度浓度的利福平、 红霉素组 培养24h后
阴性对照的数据居然显著低于所有给药组
啥情况啊? 怎么会给药反而促进细胞生长了呢？

另外之前看帖说最好吸光值在0.1-0.7之间
我测出来的所有值都在1.0-1.7之间啊
是细胞长得太密了么 还是什么原因？

求各位大侠出手相助
小女子万分感激！！

补充：药是用DMSO溶的 给药组和对照组都含0.1%的DMSO

另外我是把配好的5mg/ml的MTT先加到培养基中稀释十倍，然后再给到每个孔的
这样和每孔先各给20ul 5mg/ml的MTT 再补180ul的培养基 有区别么？

[ Last edited by fridayalicia on 2012-5-21 at 10:57 ]
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1楼 2012-05-21 10:27:47
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cbcbstc

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+1, 鼓励一下撒 2012-05-22 22:30:36
阴性对照就是只加培养基不加药的是吧？这个就太奇怪了
首先不是DMSO的问题，0.5%的DMSO我都做过，没有什么毒性
10000cell/mL也应该没有问题，那我只能考虑是不是种板的时候你空白的那一行种稀了，实在是想不出更好的解释
MTT不建议你那么加，倒不是说哪里有问题，我是没见过这么混着加的，你还是直接加吧
至于吸光度的问题，一般加药孔不应该过1，你要是觉得大了就早点加药，不要等细胞长得太满
总之，给你的意见就是，接着做呗，什么实验都不会一次成功的，尤其是细胞实验。祝LZ好运
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4楼2012-05-22 09:32:43
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
每孔接种多少，做了几个复孔，重复了几次实验，倒掉MTT的时候要轻，别把细胞也倒掉了，加DMSO之前好好看看
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2楼2012-05-21 11:15:15
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fridayalicia

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by silicare at 2012-05-21 11:15:15:
每孔接种多少，做了几个复孔，重复了几次实验，倒掉MTT的时候要轻，别把细胞也倒掉了，加DMSO之前好好看看

点板的时候是按10000cell/ml点的 200ul 长到80-90%吧 每组5个复孔 已空出边缘的三十多个空

第一次做MTT  就是觉得空白低于给药很奇怪
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3楼2012-05-21 12:04:40
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湘云紫

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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fridayalicia: 金币+1 2012-05-22 21:24:46
我做过第一次也是阴性对照的最低，后来考虑到边缘效应，就把阴性细胞组放在最终间，我现在都是喜欢把阴性组种在横着第七排。。你试试
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5楼2012-05-22 17:05:37
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湘云紫

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

吸光值高了是细胞太密了，下次你种稀点，40000个/ml就行了
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6楼2012-05-22 17:07:34
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fridayalicia

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 湘云紫 at 2012-05-22 17:07:34:
吸光值高了是细胞太密了，下次你种稀点，40000个/ml就行了

我种的是10000个/ml啊
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7楼2012-05-22 21:24:32
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
细胞太多了吧，就没啥抑制效果了吧，做了生长曲线了，了解下细胞在96孔的生长情况，在做
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8楼2012-05-23 10:10:50
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

利福平和红霉素都属于抗生素，要造成细胞毒，需要足量的浓度，不知你用了多大浓度，有没有依据文献
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9楼2012-05-23 14:56:42
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湘云紫

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

那可能是你的培养基血清含量比较高，细胞长的太快了，你可以试试降低血清浓度，比如用5% 的血清。。加油，我做MTT也做了4遍的。。开始也做不好
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10楼2012-06-12 10:07:03
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