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fridayalicia

新虫 (初入文坛)

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专业: 药物代谢与药物动力学

[求助] 求助 MTT！！！

俺第一次做MTT 出现了很囧的问题
HepG2细胞设立阴性对照、梯度浓度的利福平、红霉素组培养24h后
阴性对照的数据居然显著低于所有给药组
啥情况啊? 怎么会给药反而促进细胞生长了呢？

另外之前看帖说最好吸光值在0.1-0.7之间
我测出来的所有值都在1.0-1.7之间啊
是细胞长得太密了么还是什么原因？

求各位大侠出手相助
小女子万分感激！！

补充：药是用DMSO溶的给药组和对照组都含0.1%的DMSO

另外我是把配好的5mg/ml的MTT先加到培养基中稀释十倍，然后再给到每个孔的
这样和每孔先各给20ul 5mg/ml的MTT 再补180ul的培养基有区别么？

[ Last edited by fridayalicia on 2012-5-21 at 10:57 ]

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1楼2012-05-21 10:27:47

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cbcbstc

金虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+1, 鼓励一下撒 2012-05-22 22:30:36

阴性对照就是只加培养基不加药的是吧？这个就太奇怪了
首先不是DMSO的问题，0.5%的DMSO我都做过，没有什么毒性
10000cell/mL也应该没有问题，那我只能考虑是不是种板的时候你空白的那一行种稀了，实在是想不出更好的解释
MTT不建议你那么加，倒不是说哪里有问题，我是没见过这么混着加的，你还是直接加吧
至于吸光度的问题，一般加药孔不应该过1，你要是觉得大了就早点加药，不要等细胞长得太满
总之，给你的意见就是，接着做呗，什么实验都不会一次成功的，尤其是细胞实验。祝LZ好运