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fridayalicia

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 MTT!!!

俺第一次做MTT 出现了很囧的问题
HepG2细胞 设立 阴性对照、 梯度浓度的利福平、 红霉素组 培养24h后
阴性对照的数据居然显著低于所有给药组
啥情况啊? 怎么会给药反而促进细胞生长了呢?

另外之前看帖说最好吸光值在0.1-0.7之间
我测出来的所有值都在1.0-1.7之间啊
是细胞长得太密了么 还是什么原因?

求各位大侠出手相助
小女子万分感激!!

补充:药是用DMSO溶的 给药组和对照组都含0.1%的DMSO

另外我是把配好的5mg/ml的MTT先加到培养基中稀释十倍,然后再给到每个孔的
这样和每孔先各给20ul 5mg/ml的MTT 再补180ul的培养基 有区别么?

[ Last edited by fridayalicia on 2012-5-21 at 10:57 ]
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cbcbstc

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+1, 鼓励一下撒 2012-05-22 22:30:36
阴性对照就是只加培养基不加药的是吧?这个就太奇怪了
首先不是DMSO的问题,0.5%的DMSO我都做过,没有什么毒性
10000cell/mL也应该没有问题,那我只能考虑是不是种板的时候你空白的那一行种稀了,实在是想不出更好的解释
MTT不建议你那么加,倒不是说哪里有问题,我是没见过这么混着加的,你还是直接加吧
至于吸光度的问题,一般加药孔不应该过1,你要是觉得大了就早点加药,不要等细胞长得太满
总之,给你的意见就是,接着做呗,什么实验都不会一次成功的,尤其是细胞实验。祝LZ好运
4楼2012-05-22 09:32:43
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
每孔接种多少,做了几个复孔,重复了几次实验,倒掉MTT的时候要轻,别把细胞也倒掉了,加DMSO之前好好看看
2楼2012-05-21 11:15:15
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fridayalicia

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by silicare at 2012-05-21 11:15:15:
每孔接种多少,做了几个复孔,重复了几次实验,倒掉MTT的时候要轻,别把细胞也倒掉了,加DMSO之前好好看看

点板的时候是按10000cell/ml点的 200ul 长到80-90%吧 每组5个复孔 已空出边缘的三十多个空

第一次做MTT  就是觉得空白低于给药很奇怪
3楼2012-05-21 12:04:40
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湘云紫

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fridayalicia: 金币+1 2012-05-22 21:24:46
我做过第一次也是阴性对照的最低,后来考虑到边缘效应,就把阴性细胞组放在最终间,我现在都是喜欢把阴性组种在横着第七排。。你试试
5楼2012-05-22 17:05:37
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