应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 MTT！！！
131/2返回列表12下一页
查看: 1681  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fridayalicia

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 MTT！！！

俺第一次做MTT 出现了很囧的问题
HepG2细胞 设立 阴性对照、 梯度浓度的利福平、 红霉素组 培养24h后
阴性对照的数据居然显著低于所有给药组
啥情况啊? 怎么会给药反而促进细胞生长了呢？

另外之前看帖说最好吸光值在0.1-0.7之间
我测出来的所有值都在1.0-1.7之间啊
是细胞长得太密了么 还是什么原因？

求各位大侠出手相助
小女子万分感激！！

补充：药是用DMSO溶的 给药组和对照组都含0.1%的DMSO

另外我是把配好的5mg/ml的MTT先加到培养基中稀释十倍，然后再给到每个孔的
这样和每孔先各给20ul 5mg/ml的MTT 再补180ul的培养基 有区别么？

[ Last edited by fridayalicia on 2012-5-21 at 10:57 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-21 10:27:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cbcbstc

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+1, 鼓励一下撒 2012-05-22 22:30:36
阴性对照就是只加培养基不加药的是吧？这个就太奇怪了
首先不是DMSO的问题，0.5%的DMSO我都做过，没有什么毒性
10000cell/mL也应该没有问题，那我只能考虑是不是种板的时候你空白的那一行种稀了，实在是想不出更好的解释
MTT不建议你那么加，倒不是说哪里有问题，我是没见过这么混着加的，你还是直接加吧
至于吸光度的问题，一般加药孔不应该过1，你要是觉得大了就早点加药，不要等细胞长得太满
总之，给你的意见就是，接着做呗，什么实验都不会一次成功的，尤其是细胞实验。祝LZ好运
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-05-22 09:32:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
每孔接种多少，做了几个复孔，重复了几次实验，倒掉MTT的时候要轻，别把细胞也倒掉了，加DMSO之前好好看看
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-21 11:15:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fridayalicia

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by silicare at 2012-05-21 11:15:15:
每孔接种多少，做了几个复孔，重复了几次实验，倒掉MTT的时候要轻，别把细胞也倒掉了，加DMSO之前好好看看

点板的时候是按10000cell/ml点的 200ul 长到80-90%吧 每组5个复孔 已空出边缘的三十多个空

第一次做MTT  就是觉得空白低于给药很奇怪
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-21 12:04:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

湘云紫

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fridayalicia: 金币+1 2012-05-22 21:24:46
我做过第一次也是阴性对照的最低，后来考虑到边缘效应，就把阴性细胞组放在最终间，我现在都是喜欢把阴性组种在横着第七排。。你试试
赞一下 回复此楼
5楼2012-05-22 17:05:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

湘云紫

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

吸光值高了是细胞太密了，下次你种稀点，40000个/ml就行了
赞一下 回复此楼
6楼2012-05-22 17:07:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fridayalicia

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 湘云紫 at 2012-05-22 17:07:34:
吸光值高了是细胞太密了，下次你种稀点，40000个/ml就行了

我种的是10000个/ml啊
赞一下 回复此楼
7楼2012-05-22 21:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
细胞太多了吧，就没啥抑制效果了吧，做了生长曲线了，了解下细胞在96孔的生长情况，在做
赞一下 回复此楼
8楼2012-05-23 10:10:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

【答案】应助回帖

利福平和红霉素都属于抗生素，要造成细胞毒，需要足量的浓度，不知你用了多大浓度，有没有依据文献
赞一下 回复此楼
9楼2012-05-23 14:56:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

湘云紫

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

那可能是你的培养基血清含量比较高，细胞长的太快了，你可以试试降低血清浓度，比如用5% 的血清。。加油，我做MTT也做了4遍的。。开始也做不好
赞一下 回复此楼
10楼2012-06-12 10:07:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fridayalicia 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 材料学硕318求调剂 +10 February_Feb 2026-03-01 12/600 2026-03-01 23:34 by L135790
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 12/600 2026-03-01 22:10 by 海嵙Y
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭