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amy666666

木虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】关于MTT 已有4人参与

最近在做MTT,但是发现个问题: 细胞是种在膜上的,当用DMSO溶解甲瓒的时候材料也会溶解。材料是高分子,溶解以后对DMSO粘度肯定会有影响,因此数据也受到影响。请问有没有什么其他的可以溶解甲瓒的溶剂,或者有其他的测试MTT的方法来解决。
还有一个问题是MTT2 4 6 天结果,第四天相对第二天吸光度降低,但是阴性对照没有变化,但第六天比第四天增加很多,比第二天也要增加,对照也增加了。这种情况怎么解释呢?
因为我是做材料的,对MTT的了解还很少,请大家帮忙分析一下,先谢过各位了。
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mizunoer

铜虫 (正式写手)


americanyk(金币+1):Thank you 2010-10-31 17:53:44
amy666666(金币+2): 2010-11-01 10:33:49
shileinjut:欢迎交流! 2010-11-18 12:45:43
引用回帖:
Originally posted by amy666666 at 2010-10-31 11:14:27:
分子量大概在十万左右
空白准备在孔板中做

那这样做MTT 我觉得没有意义的  一般的材料肯定涨不过孔板的! 建议还是做live/dead 观察细胞的形貌 和 活死细胞的比例 做一个时间变化!
8楼2010-10-31 11:45:09
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静天之蓝

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
mtt 的重复性不好 ?那怎么办 其他办法代替?
10楼2012-10-07 13:55:40
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普通回帖

zhaoting2007

金虫 (小有名气)

★ ★
shileinjut(金币+1):谢谢参与! 2010-10-30 13:29:56
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论! 2010-10-30 21:23:33
amy666666(金币+2): 2010-10-31 03:54:26
XTT,WST-1等,网上都有介绍,不知道适不适合你的高分子膜。http://www.biobars.cn/a/jishu/xibaoshiyan/20100524/4210.html
对于实验结果问题,MTT重复性本来就不是很好,需要多次重复实验来验证实验结果的正确性,而且膜的溶解应该也会对实验结果产生影响
2楼2010-10-30 09:53:53
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luckyforrest

金虫 (小有名气)

盐酸异丙醇试试吧


yusen_1982(金币+1):欢迎讨论! 2010-10-30 21:23:40
amy666666(金币+2): 2010-10-31 03:54:44
引用回帖:
Originally posted by amy666666 at 2010-10-29 15:01:45:
最近在做MTT,但是发现个问题: 细胞是种在膜上的,当用DMSO溶解甲瓒的时候材料也会溶解。材料是高分子,溶解以后对DMSO粘度肯定会有影响,因此数据也受到影响。请问有没有什么其他的可以溶解甲瓒的溶剂,或者有其 ...

盐酸异丙醇试试吧,但是溶解的一步时间长一点
3楼2010-10-30 14:41:24
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mizunoer

铜虫 (正式写手)


yusen_1982(金币+1):欢迎讨论! 2010-10-30 21:23:49
amy666666(金币+2): 2010-10-31 03:55:10
你的膜是脂肪族聚酯吗?膜应该是没有影响的,在500nm多是不会有紫外吸收的!我就这么做的,没有关系的!
4楼2010-10-30 17:57:26
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amy666666

木虫 (初入文坛)

shileinjut: 2010-11-18 12:45:28
谢谢各位了。
回楼上,我的膜是聚醚砜的,DMSO会溶解,我也做过实验,溶解以后确实会对产生影响。
昨天看文献上说盐酸异丙醇会和胎牛血清产生沉淀,对结果产生影响,不知影响大吗?还有就是看到有用荧光染色直接看细胞数量的文献,不知可以不?
5楼2010-10-31 04:04:48
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mizunoer

铜虫 (正式写手)

amy666666(金币+2): 2010-10-31 11:14:51
引用回帖:
Originally posted by amy666666 at 2010-10-31 04:04:48:
谢谢各位了。
回楼上,我的膜是聚醚砜的,DMSO会溶解,我也做过实验,溶解以后确实会对产生影响。
昨天看文献上说盐酸异丙醇会和胎牛血清产生沉淀,对结果产生影响,不知影响大吗?还有就是看到有用荧光染色直接 ...

你那个膜分子量多少?如果有影响的话也不应该是你前面所说的粘度,你可以给你的聚合物的DMSO溶液扫一个紫外全谱,看看他的吸收情况!

当然可以通过荧光染色直接观看,就是live/dead吧  可以用钙黄绿素染活细胞,电话吡啶染死细胞!

问下 你铺膜做MTT 你的空白对照是什么?孔板吗?
6楼2010-10-31 10:55:03
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amy666666

木虫 (初入文坛)

shileinjut:欢迎交流! 2010-11-18 12:45:38
分子量大概在十万左右
空白准备在孔板中做
7楼2010-10-31 11:14:27
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amy666666

木虫 (初入文坛)

shileinjut:欢迎交流! 2010-11-18 12:45:46
引用回帖:
Originally posted by mizunoer at 2010-10-31 11:45:09:



那这样做MTT 我觉得没有意义的  一般的材料肯定涨不过孔板的! 建议还是做live/dead 观察细胞的形貌 和 活死细胞的比例 做一个时间变化!

谢谢你的建议
9楼2010-11-01 10:31:41
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