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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 实验结果太奇怪了
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1029016431

银虫 (小有名气)

[求助] 实验结果太奇怪了 已有4人参与

做的是一种植物的全长cDNA文库，文库建好后挑单克隆拿去测序，测序结果既不是插入片段序列，也不是质粒载体序列，确实大肠杆菌序列！邪门！哪位专业人士能给个合理解释吗？不胜感激！
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势必一飞
1楼 2015-05-19 20:03:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

普鲁旺斯花季

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-05-20 09:00:43
应该是你的载体也没有转进大肠杆菌中，长的只是细菌，如果是抗性筛选的话，那可能是出现了耐受菌或者污染了
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一生转而得一夏，当司掌好年华
2楼2015-05-19 23:40:55
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普通回帖

1029016431

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 普鲁旺斯花季 at 2015-05-19 23:40:55
应该是你的载体也没有转进大肠杆菌中，长的只是细菌，如果是抗性筛选的话，那可能是出现了耐受菌或者污染了

质粒载体有氯霉素抗性，请问倘若是被抗性株污染的话，在什么时候污染的才会把原来的插入片段序列掩盖呢？抗性株的数量在转化是应该还远没有非抗性株和插入片段多吧

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势必一飞
3楼2015-05-20 08:21:30
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yhz0626

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒空载，但抗生素并没有筛选除去，假阳性，可以再加上蓝白斑筛选

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4楼2015-05-20 23:33:37
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1029016431

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yhz0626 at 2015-05-20 23:33:37
质粒空载，但抗生素并没有筛选除去，假阳性，可以再加上蓝白斑筛选

那测序结果为何不是质粒序列呢，这个载体好像没LacZ基因，所以蓝白斑筛选不了。

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势必一飞
5楼2015-05-22 01:03:56
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yhz0626

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 1029016431 at 2015-05-22 01:03:56
那测序结果为何不是质粒序列呢，这个载体好像没LacZ基因，所以蓝白斑筛选不了。
...

那会不会是转化过程出了问题，质粒没能导入感受态细胞里

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6楼2015-05-22 10:31:26
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1029016431

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yhz0626 at 2015-05-22 10:31:26
那会不会是转化过程出了问题，质粒没能导入感受态细胞里
...

如果质粒没转进入的话，大肠杆菌自身是无法在氯霉素环境中生长的，只有转进去的质粒上才有氯霉素抗性基因

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势必一飞
7楼2015-05-22 13:15:00
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yhz0626

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 1029016431 at 2015-05-22 13:15:00
如果质粒没转进入的话，大肠杆菌自身是无法在氯霉素环境中生长的，只有转进去的质粒上才有氯霉素抗性基因
...

那就没道理了，测序的时候也是用的质粒上的引物序列，没道理会扩到大肠杆菌基因组上

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8楼2015-05-22 16:10:45
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北斗虫儿

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

测序是个运气活。。。。。当年测了2回，第二回。总共80个样，最后挑了32个，结果测出两个来。。。
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9楼2015-05-23 12:17:21
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1029016431

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yhz0626 at 2015-05-22 16:10:45
那就没道理了，测序的时候也是用的质粒上的引物序列，没道理会扩到大肠杆菌基因组上
...

可不是？所以才说结果奇怪，无法解释。

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势必一飞
10楼2015-05-23 17:26:34
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