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1029016431

银虫 (小有名气)

[求助] 实验结果太奇怪了已有4人参与

做的是一种植物的全长cDNA文库,文库建好后挑单克隆拿去测序,测序结果既不是插入片段序列,也不是质粒载体序列,确实大肠杆菌序列!邪门!哪位专业人士能给个合理解释吗?不胜感激!
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普鲁旺斯花季

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-05-20 09:00:43
应该是你的载体也没有转进大肠杆菌中,长的只是细菌,如果是抗性筛选的话,那可能是出现了耐受菌或者污染了
一生转而得一夏,当司掌好年华
2楼2015-05-19 23:40:55
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普通回帖

1029016431

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 普鲁旺斯花季 at 2015-05-19 23:40:55
应该是你的载体也没有转进大肠杆菌中,长的只是细菌,如果是抗性筛选的话,那可能是出现了耐受菌或者污染了

质粒载体有氯霉素抗性,请问倘若是被抗性株污染的话,在什么时候污染的才会把原来的插入片段序列掩盖呢?抗性株的数量在转化是应该还远没有非抗性株和插入片段多吧

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势必一飞
3楼2015-05-20 08:21:30
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yhz0626

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒空载,但抗生素并没有筛选除去,假阳性,可以再加上蓝白斑筛选

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4楼2015-05-20 23:33:37
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1029016431

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yhz0626 at 2015-05-20 23:33:37
质粒空载,但抗生素并没有筛选除去,假阳性,可以再加上蓝白斑筛选

那测序结果为何不是质粒序列呢,这个载体好像没LacZ基因,所以蓝白斑筛选不了。

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势必一飞
5楼2015-05-22 01:03:56
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yhz0626

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 1029016431 at 2015-05-22 01:03:56
那测序结果为何不是质粒序列呢,这个载体好像没LacZ基因,所以蓝白斑筛选不了。
...

那会不会是转化过程出了问题,质粒没能导入感受态细胞里

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6楼2015-05-22 10:31:26
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1029016431

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yhz0626 at 2015-05-22 10:31:26
那会不会是转化过程出了问题,质粒没能导入感受态细胞里
...

如果质粒没转进入的话,大肠杆菌自身是无法在氯霉素环境中生长的,只有转进去的质粒上才有氯霉素抗性基因

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势必一飞
7楼2015-05-22 13:15:00
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yhz0626

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 1029016431 at 2015-05-22 13:15:00
如果质粒没转进入的话,大肠杆菌自身是无法在氯霉素环境中生长的,只有转进去的质粒上才有氯霉素抗性基因
...

那就没道理了,测序的时候也是用的质粒上的引物序列,没道理会扩到大肠杆菌基因组上

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8楼2015-05-22 16:10:45
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北斗虫儿

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

测序是个运气活。。。。。当年测了2回,第二回。总共80个样,最后挑了32个,结果测出两个来。。。
9楼2015-05-23 12:17:21
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1029016431

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yhz0626 at 2015-05-22 16:10:45
那就没道理了,测序的时候也是用的质粒上的引物序列,没道理会扩到大肠杆菌基因组上
...

可不是?所以才说结果奇怪,无法解释。

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势必一飞
10楼2015-05-23 17:26:34
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