24小时热门版块排行榜    

查看: 1573  |  回复: 14

1029016431

银虫 (小有名气)

[求助] 实验结果太奇怪了 已有4人参与

做的是一种植物的全长cDNA文库,文库建好后挑单克隆拿去测序,测序结果既不是插入片段序列,也不是质粒载体序列,确实大肠杆菌序列!邪门!哪位专业人士能给个合理解释吗?不胜感激!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

势必一飞
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

普鲁旺斯花季

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-05-20 09:00:43
应该是你的载体也没有转进大肠杆菌中,长的只是细菌,如果是抗性筛选的话,那可能是出现了耐受菌或者污染了
一生转而得一夏,当司掌好年华
2楼2015-05-19 23:40:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

1029016431

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 普鲁旺斯花季 at 2015-05-19 23:40:55
应该是你的载体也没有转进大肠杆菌中,长的只是细菌,如果是抗性筛选的话,那可能是出现了耐受菌或者污染了

质粒载体有氯霉素抗性,请问倘若是被抗性株污染的话,在什么时候污染的才会把原来的插入片段序列掩盖呢?抗性株的数量在转化是应该还远没有非抗性株和插入片段多吧

[ 发自小木虫客户端 ]
势必一飞
3楼2015-05-20 08:21:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yhz0626

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒空载,但抗生素并没有筛选除去,假阳性,可以再加上蓝白斑筛选

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-05-20 23:33:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1029016431

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yhz0626 at 2015-05-20 23:33:37
质粒空载,但抗生素并没有筛选除去,假阳性,可以再加上蓝白斑筛选

那测序结果为何不是质粒序列呢,这个载体好像没LacZ基因,所以蓝白斑筛选不了。

[ 发自小木虫客户端 ]
势必一飞
5楼2015-05-22 01:03:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yhz0626

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 1029016431 at 2015-05-22 01:03:56
那测序结果为何不是质粒序列呢,这个载体好像没LacZ基因,所以蓝白斑筛选不了。
...

那会不会是转化过程出了问题,质粒没能导入感受态细胞里

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2015-05-22 10:31:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1029016431

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yhz0626 at 2015-05-22 10:31:26
那会不会是转化过程出了问题,质粒没能导入感受态细胞里
...

如果质粒没转进入的话,大肠杆菌自身是无法在氯霉素环境中生长的,只有转进去的质粒上才有氯霉素抗性基因

[ 发自小木虫客户端 ]
势必一飞
7楼2015-05-22 13:15:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yhz0626

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 1029016431 at 2015-05-22 13:15:00
如果质粒没转进入的话,大肠杆菌自身是无法在氯霉素环境中生长的,只有转进去的质粒上才有氯霉素抗性基因
...

那就没道理了,测序的时候也是用的质粒上的引物序列,没道理会扩到大肠杆菌基因组上

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2015-05-22 16:10:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

北斗虫儿

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

测序是个运气活。。。。。当年测了2回,第二回。总共80个样,最后挑了32个,结果测出两个来。。。
9楼2015-05-23 12:17:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1029016431

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yhz0626 at 2015-05-22 16:10:45
那就没道理了,测序的时候也是用的质粒上的引物序列,没道理会扩到大肠杆菌基因组上
...

可不是?所以才说结果奇怪,无法解释。

[ 发自小木虫客户端 ]
势必一飞
10楼2015-05-23 17:26:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1029016431 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我面上完蛋了 +10 且听虎啸 2026-08-20 11/550 2026-08-25 07:12 by echo8914667
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 8/400 2026-08-25 05:12 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见