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用DNS法测还原糖遇到的问题，请各位帮忙
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本人在实验室做微生物生长过程中的还原糖曲线，用的是DNS试剂。 问题1-----DNS试剂： 1、加入3.15g 3,5-二硝基水杨酸 + 250ml 水 溶解 2、加入10.5g氢氧化钠溶解，依次加入91g 酒石酸钾钠，2.5g苯酚、2.5g无水亚硫酸钠 3、定容500ml，放置1星期 配制过程中没有出现常见的沉淀或者鸡蛋花，在试剂里加入一点还原糖，经加热会变成棕红色！不知道配制的DNS试剂有没有错?! 问题2-----测试方法 1、标准曲线 管号 0 1 2 3 4 5 6 半乳糖醛酸标准液（mL） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水（mL） 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 DNS试剂（mL） 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 将各管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即冷却至室温，在540nm波长下，用0号管调零，分别读取1~6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，半乳糖醛酸毫克数为横坐标，绘制标准曲线。 2、样品中还原糖含量的测定 取发酵液，8000r/min下离心5min，于试管中准确加入2ml上清液，再加2mLDNS试剂，将试管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即冷却至室温，以标准曲线0号试管作为参比，在540nm波长下比色，记录吸光度。 结果重复了好几次，测出来的吸光度都是在0.5左右，没有表现出随时间而变化的迹象，可以说是分布在一条水平直线上的点，没有明显规律。理论让应该是一条先增长后略降低的曲线。不知道问题出在哪里？！ |
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