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yang824

木虫 (小有名气)

[求助] 吸光度和样品稀释问题

你好,向大家请教一下,我的是要做总糖含量测定,但是我的葡萄糖标线读数最小的就是1.7,后面几个浓度读数都一样,这是不是就说明我的葡萄糖标准品浓度过大,需要稀释呢,我目测我的样品颜色比葡萄糖深好多,是不是更加需要稀释,而且样品要比标准品稀释倍数更大,这样做会不会误差也很大,我应该具体怎么稀释能让我的样品的吸光度落在标准曲线上面呢?另外,是所有的紫外分光光度计的读书都是在0.2-0.8之间是最准确的吗?希望赐教!万分感谢!!!!
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zhupeilei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
yang824: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-06-13 09:30:13
引用回帖:
6楼: Originally posted by yang824 at 2013-06-09 09:36:06
我这样问不知道你能不能理解:标线稀释了10倍,得到的OD要乘以稀释倍数就是10,才是原来标线的OD,对吧,然后样品要是也想稀释同样的倍数,得到的OD直接在标线上找出对应的含糖量,含糖量再乘以稀释倍数是样品正常 ...

我觉得不对。OD值是不应该换算的,能换算的只能是浓度。你的稀释只是把样品浓度稀释了,而不是OD值。我觉得应该是这样子的:首先,将标线按10或者其他倍数浓度稀释,稀释之后的浓度是可以算出来吧,OD也是可以测出来的。这样就有了浓度和吸光度的标准曲线。然后你的样品按一定倍数稀释,稀释之后的OD能在标准曲线上找到一个浓度值,这个浓度乘以样品的稀释倍数,就是样品的浓度了。不用考虑标线原来的浓度,浓度可以换算,OD不可以。
特立独行
7楼2013-06-09 12:04:16
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Andyllk

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yang824: 金币+1, 有帮助 2013-06-13 09:31:45
假如你标线稀释10倍,样品稀释50倍的话,计算总糖时要乘于的稀释倍数是(50/10=5),即乘于5。尽量使吸光度落在0.2-0.8这样精确些,所以你的标线和样品都要稀释到0.2-0.8。但是稀释倍数可以不一样,到时候按上面的方法算就行。如果你不想麻烦,可以增大你的分取倍数

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2013-06-09 14:17:05
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zhupeilei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by yang824 at 2013-06-13 09:31:19
我用硫酸苯酚法测总糖含量,DNS法测还原糖含量,但是葡萄糖标准品和样品在测总糖的时候吸光值超过了紫外范围,所以我就稀释了一百倍做的,然后还原糖的时候没有稀释(还原糖要是稀释测不出来吸光值),现在结果是还 ...

我没测过糖。能想到的只有两点:1. 浓度换算有没有出错。 2. 实验操作误差是不是没控制好呢。
特立独行
12楼2013-06-14 11:53:09
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普通回帖

heyj1234

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yang824: 金币+1, 有帮助 2013-06-09 08:02:23
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖应助 2013-06-09 11:07:30
基本上读数落在0.2-0.8.不可以稀释3倍或4倍再进行操作,结果就比较精确。祝成功!
激情的时代
2楼2013-06-09 06:44:08
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heyj1234

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖应助 2013-06-09 11:07:10
基本上读数落在0.2-0.8.可以稀释3倍或4倍再进行操作,结果就比较精确。祝成功
激情的时代
3楼2013-06-09 06:44:34
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yang824

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by heyj1234 at 2013-06-09 06:44:08
基本上读数落在0.2-0.8.不可以稀释3倍或4倍再进行操作,结果就比较精确。祝成功!

标线稀释3倍或4倍,那样品是不是要稀释的更多倍数
4楼2013-06-09 07:55:43
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zhupeilei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖应助 2013-06-09 11:07:15
我一般是按照梯度稀释法10倍,100倍这样稀释的,最好是能一步稀释到位,而且样品和标品应该稀释相同的倍数,否则误差很大。吸光度不一定非要在0.2~0.8之间,0~1之间就很合理了。
特立独行
5楼2013-06-09 08:03:28
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yang824

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhupeilei at 2013-06-09 08:03:28
我一般是按照梯度稀释法10倍,100倍这样稀释的,最好是能一步稀释到位,而且样品和标品应该稀释相同的倍数,否则误差很大。吸光度不一定非要在0.2~0.8之间,0~1之间就很合理了。

我这样问不知道你能不能理解:标线稀释了10倍,得到的OD要乘以稀释倍数就是10,才是原来标线的OD,对吧,然后样品要是也想稀释同样的倍数,得到的OD直接在标线上找出对应的含糖量,含糖量再乘以稀释倍数是样品正常应该含有的糖量,是这样做吗?还是要样品稀释后得到的OD乘以稀释倍数再在标线上找出对应的含糖量,这样的话,结果肯定不在标线所测的范围内啊
6楼2013-06-09 09:36:06
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yang824

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zhupeilei at 2013-06-09 12:04:16
我觉得不对。OD值是不应该换算的,能换算的只能是浓度。你的稀释只是把样品浓度稀释了,而不是OD值。我觉得应该是这样子的:首先,将标线按10或者其他倍数浓度稀释,稀释之后的浓度是可以算出来吧,OD也是可以测出 ...

我用硫酸苯酚法测总糖含量,DNS法测还原糖含量,但是葡萄糖标准品和样品在测总糖的时候吸光值超过了紫外范围,所以我就稀释了一百倍做的,然后还原糖的时候没有稀释(还原糖要是稀释测不出来吸光值),现在结果是还原糖含量比总糖含量高,请问这是什么原因?
9楼2013-06-13 09:31:19
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yang824

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Andyllk at 2013-06-09 14:17:05
假如你标线稀释10倍,样品稀释50倍的话,计算总糖时要乘于的稀释倍数是(50/10=5),即乘于5。尽量使吸光度落在0.2-0.8这样精确些,所以你的标线和样品都要稀释到0.2-0.8。但是稀释倍数可以不一样,到时候按上面的方法 ...

我用硫酸苯酚法测总糖含量,DNS法测还原糖含量,但是葡萄糖标准品和样品在测总糖的时候吸光值超过了紫外范围,所以我就稀释了一百倍做的,然后还原糖的时候没有稀释(还原糖稀释测不出来吸光值),现在结果是还原糖含量比总糖含量高,请问这是什么原因?
10楼2013-06-13 09:32:27
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