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做elisa的时候，阴性对照也要做梯度稀释吗 已有2人参与
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做elisa的时候，阴性对照也要做梯度稀释吗？还是选择起始稀释度作为阴性对照？ 我做的时候把阴性对照也是做梯度稀释的 发现在相同稀释度的情况下，我样品的吸光度正好是阴性对照的两倍，我不知道怎么判断滴度了 请大家指导，谢谢 我的实验是这样的，先用抗原包被，然后加入梯度稀释的待测小鼠血清作为一抗，最后用酶标抗体作为二抗并显色。为了判定处理后小鼠血清的抗体滴度，我选用的未处理的小鼠血清作为阴性对照，并认为吸光度高于阴性值两倍判定为其滴度。我的问题是未处理小鼠的血清是直接拿来作为阴性对照，还是要进行稀释？如果要稀释，该怎么稀释才科学？非常感谢 [ Last edited by bolix on 2012-11-14 at 14:52 ] |
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从理论上说，阴性对照的血清，不论稀释多少倍，OD值都不应该有明显变化。有两种可能：1.正常小鼠本身含有该抗原的抗体；2.ELISA过程中非特异性反应去除不干净，如洗板、孵育温度时间、抗原抗体浓度等，这样稀释倍数越高的样本其对结果的影响就越小，就呈现逐渐下降的趋势。你的阴性孔的OD值有多少呢，正常情况应低于0.1，不然就要优化下整个实验体系了。 判断阴阳性，以阴性OD值的2倍作为判断标准只是根据我们一般的经验而定，更科学的方法是，测定一批阴性样品（比如20个以上），计算OD平均值及标准差，以平均值+2或3倍标准差作为阴阳性的界限 |
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