应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 做elisa的时候，阴性对照也要做梯度稀释吗
51/1返回列表
查看: 2081  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

bolix

铁虫 (正式写手)

[交流] 做elisa的时候，阴性对照也要做梯度稀释吗 已有2人参与

做elisa的时候，阴性对照也要做梯度稀释吗？还是选择起始稀释度作为阴性对照？
我做的时候把阴性对照也是做梯度稀释的
发现在相同稀释度的情况下，我样品的吸光度正好是阴性对照的两倍，我不知道怎么判断滴度了
请大家指导，谢谢

我的实验是这样的，先用抗原包被，然后加入梯度稀释的待测小鼠血清作为一抗，最后用酶标抗体作为二抗并显色。为了判定处理后小鼠血清的抗体滴度，我选用的未处理的小鼠血清作为阴性对照，并认为吸光度高于阴性值两倍判定为其滴度。我的问题是未处理小鼠的血清是直接拿来作为阴性对照，还是要进行稀释？如果要稀释，该怎么稀释才科学？非常感谢

[ Last edited by bolix on 2012-11-14 at 14:52 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-13 22:48:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阴性对照不是不加抗原或抗体吗，怎么梯度稀释啊
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-14 12:29:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolix

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by berniehuang at 2012-11-14 12:29:11
阴性对照不是不加抗原或抗体吗，怎么梯度稀释啊

我是用的未处理的血清作为对照的
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-14 14:45:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
从理论上说，阴性对照的血清，不论稀释多少倍，OD值都不应该有明显变化。有两种可能：1.正常小鼠本身含有该抗原的抗体；2.ELISA过程中非特异性反应去除不干净，如洗板、孵育温度时间、抗原抗体浓度等，这样稀释倍数越高的样本其对结果的影响就越小，就呈现逐渐下降的趋势。你的阴性孔的OD值有多少呢，正常情况应低于0.1，不然就要优化下整个实验体系了。
判断阴阳性，以阴性OD值的2倍作为判断标准只是根据我们一般的经验而定，更科学的方法是，测定一批阴性样品（比如20个以上），计算OD平均值及标准差，以平均值+2或3倍标准差作为阴阳性的界限
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-14 16:54:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8515171

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不需要稀释吧，直接以小鼠的正常血清作为对照即可！
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-14 22:42:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bolix 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭