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sutol329

新虫 (初入文坛)

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[求助] ELISA的一些小疑问

最近刚开始准备设计做一个ELISA的实验，检测一个Fc受体CD16和一个细胞因子受体TNFR与抗体Fc融合蛋白的亲和力。具体方案不知该怎么选择。大家给提提意见。
首先包被时候是选择CD16直接包被还是用CD16的抗体后在结合CD16呢？
其次，包被后封闭的时候封闭液有加BSA，有加海藻糖，有加明胶，这个选择有什么讲究么？我该如何选择呢？
而后我计划加入融合蛋白，在通过HRP偶联的TNFR的抗体结合，TMB显色。
我的计划是否可行呢？该如何选择呢？

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1楼2012-10-05 15:24:33

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jfj_tj

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

测定亲和力有专门的文献参考的，不是很难，中文和英文方面都有相关文献；你说的ELISA封闭问题其实你想复杂了，只要能达到封闭效果就可以了呀，一般1%的BSA或5%的milk都可以的，但是如果你想仔细的摸索出最好的封闭液组合倒是另外一回事了；你的计划是属于一般ELISA的步骤，往下做做看就好了。ELISA挺成熟也挺简单的。希望对你有用。