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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ELISA的一些小疑问
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sutol329

新虫 (初入文坛)

[求助] ELISA的一些小疑问

最近刚开始准备设计做一个ELISA的实验，检测一个Fc受体CD16和一个细胞因子受体TNFR与抗体Fc融合蛋白的亲和力。具体方案不知该怎么选择。大家给提提意见。
首先包被时候是选择CD16直接包被还是用CD16的抗体后在结合CD16呢？
其次，包被后封闭的时候封闭液有加BSA，有加海藻糖，有加明胶，这个选择有什么讲究么？我该如何选择呢？
而后我计划加入融合蛋白，在通过HRP偶联的TNFR的抗体结合，TMB显色。
我的计划是否可行呢？该如何选择呢？
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1楼 2012-10-05 15:24:33
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

测定亲和力有专门的文献参考的，不是很难，中文和英文方面都有相关文献；你说的ELISA封闭问题其实你想复杂了，只要能达到封闭效果就可以了呀，一般1%的BSA或5%的milk都可以的，但是如果你想仔细的摸索出最好的封闭液组合倒是另外一回事了；你的计划是属于一般ELISA的步骤，往下做做看就好了。ELISA挺成熟也挺简单的。希望对你有用。
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Orbetterit,orenjoyit!
2楼2012-10-10 12:15:24
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limichuan

金虫 (正式写手)

免疫学实验超人qq：858200882

【答案】应助回帖

问题不够明朗，过于庞大，建议写下你的思路，问题逐个讨论分析！
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本公司专业从事蛋白纯化，抗体制备等免疫实验技术服务。欢迎咨询qq：858200882
3楼2012-11-28 11:43:17
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

看英文文献看大家怎么做的然后加以选择，文献应该有很多。
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4楼2012-11-28 16:57:28
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haodanfeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

用CD16的抗体包被，用0.1%的BSA封闭，之后加融合蛋白，再通过HRP偶联的TNFR的抗体结合，TMB显色。
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5楼2013-01-14 12:06:45
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