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sutol329

新虫 (初入文坛)

[求助] ELISA的一些小疑问

最近刚开始准备设计做一个ELISA的实验,检测一个Fc受体CD16和一个细胞因子受体TNFR与抗体Fc融合蛋白的亲和力。具体方案不知该怎么选择。大家给提提意见。
首先包被时候是选择CD16直接包被还是用CD16的抗体后在结合CD16呢?
其次,包被后封闭的时候封闭液有加BSA,有加海藻糖,有加明胶,这个选择有什么讲究么?我该如何选择呢?
而后我计划加入融合蛋白,在通过HRP偶联的TNFR的抗体结合,TMB显色。
我的计划是否可行呢?该如何选择呢?
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

测定亲和力有专门的文献参考的,不是很难,中文和英文方面都有相关文献;你说的ELISA封闭问题其实你想复杂了,只要能达到封闭效果就可以了呀,一般1%的BSA或5%的milk都可以的,但是如果你想仔细的摸索出最好的封闭液组合倒是另外一回事了;你的计划是属于一般ELISA的步骤,往下做做看就好了。ELISA挺成熟也挺简单的。希望对你有用。
Orbetterit,orenjoyit!
2楼2012-10-10 12:15:24
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limichuan

金虫 (正式写手)

免疫学实验超人qq:858200882

【答案】应助回帖

问题不够明朗,过于庞大,建议写下你的思路,问题逐个讨论分析!
本公司专业从事蛋白纯化,抗体制备等免疫实验技术服务。欢迎咨询qq:858200882
3楼2012-11-28 11:43:17
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

看英文文献看大家怎么做的然后加以选择,文献应该有很多。
4楼2012-11-28 16:57:28
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haodanfeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

用CD16的抗体包被,用0.1%的BSA封闭,之后加融合蛋白,再通过HRP偶联的TNFR的抗体结合,TMB显色。
5楼2013-01-14 12:06:45
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