| 查看: 2358 | 回复: 4 | |||
[交流]
做elisa的时候，阴性对照也要做梯度稀释吗 已有2人参与
|
|
做elisa的时候，阴性对照也要做梯度稀释吗？还是选择起始稀释度作为阴性对照？ 我做的时候把阴性对照也是做梯度稀释的 发现在相同稀释度的情况下，我样品的吸光度正好是阴性对照的两倍，我不知道怎么判断滴度了 请大家指导，谢谢 我的实验是这样的，先用抗原包被，然后加入梯度稀释的待测小鼠血清作为一抗，最后用酶标抗体作为二抗并显色。为了判定处理后小鼠血清的抗体滴度，我选用的未处理的小鼠血清作为阴性对照，并认为吸光度高于阴性值两倍判定为其滴度。我的问题是未处理小鼠的血清是直接拿来作为阴性对照，还是要进行稀释？如果要稀释，该怎么稀释才科学？非常感谢 [ Last edited by bolix on 2012-11-14 at 14:52 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
怎么看青基中了没有啊
已经有6人回复
-
国社科又开始会评了，不知道这次命运如何
已经有11人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有19人回复
-
基金未中，这种答复是模板吗？
已经有7人回复
-
哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识
已经有7人回复
-
面上意见出来了
已经有23人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 做Elisa pot的时候，空白对照斑点数接近最高为什么？
已经有2人回复
- 各位虫友，我想请教一下，各位做elisa稀释血清的时候
已经有0人回复
- 当你觉得你无法胜任现在的工作的时候，你会怎么选择？
已经有23人回复
- 蛋白活性实验ELISA检测结果无法解释，求助。
已经有8人回复
- ELISA标准曲线的时候 是用浓度的值做横坐标，还是用浓度值的对数做横坐标？
已经有1人回复
- 血清和组织做ELISA
已经有6人回复
- 帮同学问几个elisa方面的问题，求各位大神帮帮忙，关系到小弟我的终身大事啊！
已经有2人回复
- 包涵体蛋白做间接ELISA，显色不稳定，望做过的高手帮忙看一下，万分感激！！！
已经有2人回复
- 有关ELISA中PBS的浓度
已经有10人回复
- 连续做了两边ELISA，为什么会不显色呢？
已经有5人回复
- 一抗用含0.5%BSA的PBS液分装，做ELISA的时候无效？
已经有3人回复
- 急求解答，药代组织分布的困惑
已经有17人回复
- ELISA的一些小疑问
已经有4人回复
- 影响竞争Elisa结果的因素
已经有6人回复
- 做HRP标记ELISA和Western，一抗血清能加叠氮钠吗？
已经有7人回复
- ELISA 显色液空白OD偏高，P/N偏小，是否可以每孔OD减去显色液对照的值?
已经有5人回复
- ELISA反结果，求分析
已经有1人回复
- elisa用血浆，可以冻存吗？？？？急急急~~~~
已经有3人回复
- ELISA检验血清效价，数值不稳定
已经有0人回复
- 【求助/交流】ELISA中，OPD显色液的处理问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】做ELISA测效价的时候包被抗原浓度问题
已经有17人回复
berniehuang
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 4383.8
- 红花: 3
- 帖子: 303
- 在线: 782.4小时
- 虫号: 1073350
- 注册: 2010-08-12
- 专业: 免疫生物学
2楼2012-11-14 12:29:11
3楼2012-11-14 14:45:31
berniehuang
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 4383.8
- 红花: 3
- 帖子: 303
- 在线: 782.4小时
- 虫号: 1073350
- 注册: 2010-08-12
- 专业: 免疫生物学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
从理论上说，阴性对照的血清，不论稀释多少倍，OD值都不应该有明显变化。有两种可能：1.正常小鼠本身含有该抗原的抗体；2.ELISA过程中非特异性反应去除不干净，如洗板、孵育温度时间、抗原抗体浓度等，这样稀释倍数越高的样本其对结果的影响就越小，就呈现逐渐下降的趋势。你的阴性孔的OD值有多少呢，正常情况应低于0.1，不然就要优化下整个实验体系了。 判断阴阳性，以阴性OD值的2倍作为判断标准只是根据我们一般的经验而定，更科学的方法是，测定一批阴性样品（比如20个以上），计算OD平均值及标准差，以平均值+2或3倍标准差作为阴阳性的界限 |
4楼2012-11-14 16:54:52
x8515171
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1255.4
- 帖子: 60
- 在线: 32.2小时
- 虫号: 1532997
- 注册: 2011-12-11
- 性别: GG
- 专业: 免疫学研究新技术与新方法
5楼2012-11-14 22:42:18
投票:
30