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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 吸光度和样品稀释问题
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yang824

木虫 (小有名气)

[求助] 吸光度和样品稀释问题

你好，向大家请教一下，我的是要做总糖含量测定，但是我的葡萄糖标线读数最小的就是1.7，后面几个浓度读数都一样，这是不是就说明我的葡萄糖标准品浓度过大，需要稀释呢，我目测我的样品颜色比葡萄糖深好多，是不是更加需要稀释，而且样品要比标准品稀释倍数更大，这样做会不会误差也很大，我应该具体怎么稀释能让我的样品的吸光度落在标准曲线上面呢？另外，是所有的紫外分光光度计的读书都是在0.2-0.8之间是最准确的吗？希望赐教！万分感谢！！！！
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1楼2013-06-09 06:13:09
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zhupeilei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
yang824: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-06-13 09:30:13
引用回帖:
6楼: Originally posted by yang824 at 2013-06-09 09:36:06
我这样问不知道你能不能理解：标线稀释了10倍，得到的OD要乘以稀释倍数就是10，才是原来标线的OD，对吧，然后样品要是也想稀释同样的倍数，得到的OD直接在标线上找出对应的含糖量，含糖量再乘以稀释倍数是样品正常 ...

我觉得不对。OD值是不应该换算的，能换算的只能是浓度。你的稀释只是把样品浓度稀释了，而不是OD值。我觉得应该是这样子的：首先，将标线按10或者其他倍数浓度稀释，稀释之后的浓度是可以算出来吧，OD也是可以测出来的。这样就有了浓度和吸光度的标准曲线。然后你的样品按一定倍数稀释，稀释之后的OD能在标准曲线上找到一个浓度值，这个浓度乘以样品的稀释倍数，就是样品的浓度了。不用考虑标线原来的浓度，浓度可以换算，OD不可以。
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特立独行
7楼2013-06-09 12:04:16
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Andyllk

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yang824: 金币+1, ★有帮助 2013-06-13 09:31:45
假如你标线稀释10倍，样品稀释50倍的话，计算总糖时要乘于的稀释倍数是(50/10=5)，即乘于5。尽量使吸光度落在0.2-0.8这样精确些，所以你的标线和样品都要稀释到0.2-0.8。但是稀释倍数可以不一样，到时候按上面的方法算就行。如果你不想麻烦，可以增大你的分取倍数

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2013-06-09 14:17:05
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zhupeilei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by yang824 at 2013-06-13 09:31:19
我用硫酸苯酚法测总糖含量，DNS法测还原糖含量，但是葡萄糖标准品和样品在测总糖的时候吸光值超过了紫外范围，所以我就稀释了一百倍做的，然后还原糖的时候没有稀释（还原糖要是稀释测不出来吸光值），现在结果是还 ...

我没测过糖。能想到的只有两点：1. 浓度换算有没有出错。 2. 实验操作误差是不是没控制好呢。
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特立独行
12楼2013-06-14 11:53:09
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普通回帖

heyj1234

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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yang824: 金币+1, ★有帮助 2013-06-09 08:02:23
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖应助 2013-06-09 11:07:30
基本上读数落在0.2-0.8.不可以稀释3倍或4倍再进行操作，结果就比较精确。祝成功！
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激情的时代
2楼2013-06-09 06:44:08
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heyj1234

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖应助 2013-06-09 11:07:10
基本上读数落在0.2-0.8.可以稀释3倍或4倍再进行操作，结果就比较精确。祝成功
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激情的时代
3楼2013-06-09 06:44:34
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yang824

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by heyj1234 at 2013-06-09 06:44:08
基本上读数落在0.2-0.8.不可以稀释3倍或4倍再进行操作，结果就比较精确。祝成功！

标线稀释3倍或4倍，那样品是不是要稀释的更多倍数
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4楼2013-06-09 07:55:43
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zhupeilei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖应助 2013-06-09 11:07:15
我一般是按照梯度稀释法10倍，100倍这样稀释的，最好是能一步稀释到位，而且样品和标品应该稀释相同的倍数，否则误差很大。吸光度不一定非要在0.2~0.8之间，0~1之间就很合理了。
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特立独行
5楼2013-06-09 08:03:28
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yang824

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhupeilei at 2013-06-09 08:03:28
我一般是按照梯度稀释法10倍，100倍这样稀释的，最好是能一步稀释到位，而且样品和标品应该稀释相同的倍数，否则误差很大。吸光度不一定非要在0.2~0.8之间，0~1之间就很合理了。

我这样问不知道你能不能理解：标线稀释了10倍，得到的OD要乘以稀释倍数就是10，才是原来标线的OD，对吧，然后样品要是也想稀释同样的倍数，得到的OD直接在标线上找出对应的含糖量，含糖量再乘以稀释倍数是样品正常应该含有的糖量，是这样做吗？还是要样品稀释后得到的OD乘以稀释倍数再在标线上找出对应的含糖量，这样的话，结果肯定不在标线所测的范围内啊
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6楼2013-06-09 09:36:06
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yang824

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhupeilei at 2013-06-09 12:04:16
我觉得不对。OD值是不应该换算的，能换算的只能是浓度。你的稀释只是把样品浓度稀释了，而不是OD值。我觉得应该是这样子的：首先，将标线按10或者其他倍数浓度稀释，稀释之后的浓度是可以算出来吧，OD也是可以测出 ...

我用硫酸苯酚法测总糖含量，DNS法测还原糖含量，但是葡萄糖标准品和样品在测总糖的时候吸光值超过了紫外范围，所以我就稀释了一百倍做的，然后还原糖的时候没有稀释（还原糖要是稀释测不出来吸光值），现在结果是还原糖含量比总糖含量高，请问这是什么原因？
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9楼2013-06-13 09:31:19
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yang824

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Andyllk at 2013-06-09 14:17:05
假如你标线稀释10倍，样品稀释50倍的话，计算总糖时要乘于的稀释倍数是(50/10=5)，即乘于5。尽量使吸光度落在0.2-0.8这样精确些，所以你的标线和样品都要稀释到0.2-0.8。但是稀释倍数可以不一样，到时候按上面的方法 ...

我用硫酸苯酚法测总糖含量，DNS法测还原糖含量，但是葡萄糖标准品和样品在测总糖的时候吸光值超过了紫外范围，所以我就稀释了一百倍做的，然后还原糖的时候没有稀释（还原糖稀释测不出来吸光值），现在结果是还原糖含量比总糖含量高，请问这是什么原因？
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10楼2013-06-13 09:32:27
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