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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 用DNS法测还原糖遇到的问题，请各位帮忙
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小宾SKY

新虫 (初入文坛)

[求助] 用DNS法测还原糖遇到的问题，请各位帮忙

本人在实验室做微生物生长过程中的还原糖曲线，用的是DNS试剂。
问题1-----DNS试剂：
1、加入3.15g 3,5-二硝基水杨酸 + 250ml 水 溶解
2、加入10.5g氢氧化钠溶解，依次加入91g 酒石酸钾钠，2.5g苯酚、2.5g无水亚硫酸钠
3、定容500ml，放置1星期
配制过程中没有出现常见的沉淀或者鸡蛋花，在试剂里加入一点还原糖，经加热会变成棕红色！不知道配制的DNS试剂有没有错?!
问题2-----测试方法
1、标准曲线
         管号                                 0        1      2      3      4     5       6
半乳糖醛酸标准液（mL）         0    0.2    0.4    0.6    0.8    1.0    1.2
    蒸馏水（mL）                        2      1.8   1.6   1.4   1.2   1.0   0.8
  DNS试剂（mL）                      2.0    2.0    2.0    2.0    2.0    2.0    2.0
将各管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即冷却至室温，在540nm波长下，用0号管调零，分别读取1~6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，半乳糖醛酸毫克数为横坐标，绘制标准曲线。
2、样品中还原糖含量的测定
取发酵液，8000r/min下离心5min，于试管中准确加入2ml上清液，再加2mLDNS试剂，将试管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即冷却至室温，以标准曲线0号试管作为参比，在540nm波长下比色，记录吸光度。
结果重复了好几次，测出来的吸光度都是在0.5左右，没有表现出随时间而变化的迹象，可以说是分布在一条水平直线上的点，没有明显规律。理论让应该是一条先增长后略降低的曲线。不知道问题出在哪里？！
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1楼 2015-05-18 15:13:37
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虫chonny

铜虫 (小有名气)
亲亲你这是什么原因

发自小木虫Android客户端
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2楼2020-04-02 16:22:14
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
如果你的标准曲线正常。那测量应该就没问题。
你可以把你的样品稀释一倍，如果OD也降低一半。那说明样品检测没啥问题。你样品的还原糖浓度就是没发生变化。
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3楼2020-04-06 19:32:45
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weebug

版主 (著名写手)
除了测DNS, 还有测其他的吗，比如细胞浓度等。若细胞浓度增长，DNS没增长，就有可能DNS试剂有瑕疵。
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天蓝蓝兮日头晒
4楼2020-04-07 09:43:10
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食品灬戴子龙

铜虫 (小有名气)
标曲做的怎么样，标曲没问题的话，就是样品的是，微生物没有生长之类的
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5楼2022-03-08 20:34:35
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