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关于5-race的问题
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我使用的是clontech的5-race试剂盒，设计了3对引物，模板我加了90ul的TE缓冲液进行稀释，实验过程中我使用的是普通的Ex tap酶，upm加的5ul，自己的特异性引物加了1ul，模板加了1ul。 扩增过程中我筛温度进行的，58℃到68℃扩第一轮，之后进行巢式pcr，也是筛的温度，加1ul的short和1ul的特异性引物。 扩增结果是出现一条1000bp的带，测序回来证明是单引物循环。并且除了这条带其他的带都是有时扩增有有时扩增没有。 我该怎么办！！求大侠给答案啊！ |
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