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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于5-race的问题
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zuilinglong

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于5-race的问题

我使用的是clontech的5-race试剂盒，设计了3对引物，模板我加了90ul的TE缓冲液进行稀释，实验过程中我使用的是普通的Ex tap酶，upm加的5ul，自己的特异性引物加了1ul，模板加了1ul。
扩增过程中我筛温度进行的，58℃到68℃扩第一轮，之后进行巢式pcr，也是筛的温度，加1ul的short和1ul的特异性引物。
扩增结果是出现一条1000bp的带，测序回来证明是单引物循环。并且除了这条带其他的带都是有时扩增有有时扩增没有。
我该怎么办！！求大侠给答案啊！
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1楼 2015-05-15 11:26:49
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火红的夕阳

新虫 (小有名气)
我最近在做5’race，遇到跟楼主相同的情况，请问现在做出来了吗?求大神赐教。
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4楼2017-09-09 21:43:52
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zuilinglong

新虫 (初入文坛)
自己顶一下，求助啊
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2楼2015-05-17 10:40:58
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magy2006

木虫 (著名写手)
姑妄言之，姑妄听之：1、通用引物好像多了点；2、TAQ酶差了点，试试LA或者KOD的酶；
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3楼2015-06-04 10:00:27
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