24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1502  |  回复: 9

蛋白之家

新虫 (小有名气)

[求助] 询问 去磷酸化的问题及怎么处理

现有一个麻烦的问题
选用的内切酶是Xho 1  和 BamH 1  
看宝生物的那个书上说是Xho1 必须使用平滑末端的连接条件才可以连上
但是我不知道什么叫平滑末端的连接条件
意思是我用这两个酶从T载体上切下来目的片段和用这两个酶切好的表达载体 不能直接连吗?那要怎么处理一下呢?处理目的片段还是载体?具体是怎么回事  怎么弄得糊里糊涂
所以麻烦知情人士帮忙解释一下这其中的原理,以及后续应该怎么做
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蛋白之家: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-11-22 15:07:54
这里不涉及什么平滑末端啊,XhoI是一个粘性末端的酶啊,具体连接就是将你目标片段用XhoI--BamHI切,载体也用XhoI--BamHI切,然后连接,而且用不到去磷酸化这一步
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-11-22 10:57:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋白之家

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-22 10:57:09
这里不涉及什么平滑末端啊,XhoI是一个粘性末端的酶啊,具体连接就是将你目标片段用XhoI--BamHI切,载体也用XhoI--BamHI切,然后连接,而且用不到去磷酸化这一步

我也是觉得用不着去磷酸化   是那个宝生物的目录书上说的 Xho1粘性末端连接条件没有平滑末端连接条件连接效率高
3楼2012-11-22 11:47:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 蛋白之家 at 2012-11-22 11:47:45
我也是觉得用不着去磷酸化   是那个宝生物的目录书上说的 Xho1粘性末端连接条件没有平滑末端连接条件连接效率高...

只要把载体酶切干净,片段酶切下来,连接不是问题啊,不用考虑连接效率的问题,不知道你连接用的是什么酶,现在连接的产品也很多,有T4连接酶连接,我们现在用的toyobo的ligation high,16度连接30min就可以转化了
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2012-11-22 12:28:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

song1205

金虫 (正式写手)

学习了!
我来了!你在哪儿!
5楼2012-11-22 12:35:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋白之家

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-22 12:28:24
只要把载体酶切干净,片段酶切下来,连接不是问题啊,不用考虑连接效率的问题,不知道你连接用的是什么酶,现在连接的产品也很多,有T4连接酶连接,我们现在用的toyobo的ligation high,16度连接30min就可以转化了...

我们实验室都用的Katara的内切酶和连接酶   再贵的都基本不敢买  没钱呐  这次谢谢你了
6楼2012-11-22 15:07:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

diandong

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

7楼2012-11-22 16:31:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangj0754

木虫 (小有名气)

这两个酶我用过,可以直接连的,16度过夜就可以连上,没问题的
8楼2012-11-23 10:11:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋白之家

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhangj0754 at 2012-11-23 10:11:24
这两个酶我用过,可以直接连的,16度过夜就可以连上,没问题的

嗯 好  我试试  谢谢
9楼2012-11-24 11:00:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tj2012

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhangj0754 at 2012-11-23 10:11:24
这两个酶我用过,可以直接连的,16度过夜就可以连上,没问题的

酶的最适温度不是37℃吗?
10楼2012-11-24 14:33:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 蛋白之家 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 河北省自然科学基金 +5 Peterchao 2026-05-18 8/400 2026-05-24 11:58 by 晓晓爱翠翠
[基金申请] 西安交大新媒学院副院长用撤稿论文结题 +3 bjvtcliu 2026-05-24 5/250 2026-05-24 10:16 by kudofaye
[教师之家] 论文撤稿了 +3 bjvtcliu 2026-05-24 5/250 2026-05-24 10:06 by Equinoxhua
[教师之家] 某211大学教师把个人教师官方主页改成:我跑了我跑了我跑了!官宣跑路! +4 zju2000 2026-05-21 5/250 2026-05-24 09:35 by songwz
[考博] 26/27申博自荐 10+4 ZXW0202 2026-05-22 9/450 2026-05-24 08:47 by bjvtcliu
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hvkbtfonbv 2026-05-23 3/150 2026-05-24 08:01 by 9ps9vgkqva
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 pmo95bazuy 2026-05-23 7/350 2026-05-24 06:35 by fpo5ljpv91
[基金申请] 揭秘青基评审内幕:几个A才能顺利中标 +3 国自然国社科中 2026-05-23 4/200 2026-05-23 15:37 by 2000zf36392
[基金申请] 青B发送上会通知了吗 +5 chemBioBro 2026-05-22 7/350 2026-05-23 12:35 by zhuifengzhy
[考博] 博士申请 +3 焦晓明 2026-05-21 3/150 2026-05-23 11:26 by mlc840311
[论文投稿] 投稿求助,期刊 +4 希冀,有书读 2026-05-20 8/400 2026-05-22 10:16 by 希冀,有书读
[文学芳草园] 献血感触 +7 呀呀好傻 2026-05-19 13/650 2026-05-21 20:15 by 呀呀好傻
[基金申请] 面上本子正文33页,违规吗?会被低分嘛? +14 1234567wang 2026-05-17 16/800 2026-05-21 17:58 by 脆脆的饼干
[基金申请] 国自然上会要求 +7 无名者登山 2026-05-18 11/550 2026-05-21 15:50 by draco1987
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +9 fummck 2026-05-20 10/500 2026-05-21 14:17 by draco1987
[基金申请] 评审有感 +15 popular289 2026-05-18 26/1300 2026-05-21 10:35 by 西葫芦炒鸡蛋
[有机交流] 反应很差,大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 8/400 2026-05-20 22:19 by Equinoxhua
[考博] 如果工作了想读博,可以边工作边读全日制嘛? 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
信息提示
请填处理意见