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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 询问培养基调pH时的问题
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雨帘静思

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 询问培养基调pH时的问题

大家好，我做的是头孢类的发酵试验。菌种为顶头孢霉菌。
在做种子培养基的时候里面需要加入玉米浆，当调节pH的时候用氢氧化钠进行调节。可能以前没有注意，最近每次调完pH（6.5）之后培养基总是有一定量的絮状沉淀，不知道是不是正常，搅拌之后分布于培养基中，可是几分钟之后还是沉在瓶底，不知道是什么原因。
还有，在调节pH的时候氢氧化钠的浓度最好是多少？以前就是随便加的量，后来感觉这样可能会对培养基的成分产生影响。所以改为较低浓度的氢氧化钠（0.1-0.2mol/L）进行，但是这样又会使培养基的体积发生了很大的变化。
求助大家该怎么办啊？
谢谢
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1楼2012-05-06 11:38:54
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回帖置顶 ( 共有3个 )

雨帘静思

铁杆木虫 (正式写手)
雨帘静思: 回帖置顶 2012-05-08 11:03:35
引用回帖:
4楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-05-07 10:11:52:
培养基中有玉米浆时调pH出现絮状物正常，即使用玉米浆干粉也是这样，应该是是没问题的，我们一直是这么用的，灭完菌后放置一段时间絮凝物会沉降下来，用的时候摇一摇即可混匀，我们一般调pH用的NaOH的浓度是0.5mo ...

谢谢，你们调含有玉米浆的培养基的pH是多少？以前用种子培养基接种后会生长，可是在这几批次的接种之后菌种并没有生长，也没有染菌。。不知道为什么？但是菌种接到斜面上（斜面培养基成分与种子培养基不同，不含有玉米浆）且可以生长。。。不太清楚了。。纠结。。
还有对于我的这个菌种（顶头孢霉菌）应该如何保藏较好？
谢谢
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8楼2012-05-08 10:58:54
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雨帘静思

铁杆木虫 (正式写手)
雨帘静思: 回帖置顶 2012-05-08 14:45:21
引用回帖:
12楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-05-08 14:32:21:
玉米浆的质量不稳定，对微生物的培养会有一定的影响，可以根据总氮或氨基氮调节配比。如果用量不大的话可以买点玉米浆干粉替代玉米浆使用效果会好了一些，我是做细菌素发酵的，以前做种子时用玉米浆，偶尔也会出现 ...

如果改为玉米浆干粉的情况下，加量应该如何计算？
你们测量总氮或者是氨基氮的方法是什么？
菌种保藏的甘油的20-25%是其终浓度还是无菌甘油的浓度？
再请教您一个问题，我们在上罐之前需要接斜面，然后摇瓶，上罐。但是我们接斜面的一代斜面是通过甘油管划好在斜面上生长出来的。而且一代斜面就是直接放在4°C的冰箱里面，这样的话时间长了会不会对一代斜面上的菌种活力产生一定不良的影响。
可不可以通过每次进行接斜面之前首先从甘油管中划斜面，然后在转接至二代斜面，进行上罐？
谢谢。。。
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14楼2012-05-08 14:44:58
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

雨帘静思: 回帖置顶 2012-05-09 13:34:21
测总氮用凯氏定氮法，我们是用定氮仪测的，方法很简单，氨基氮是用甲醛滴定法测的，方法在网上应该能查到，如果查不到给我个邮箱号，我发给你。
按总氮加玉米浆干粉的计算方法：
玉米浆干粉加入的比例＝培养基中玉米浆的量×玉米浆的总氮/玉米浆干粉的总氮
按氨基氮加入玉米浆干粉的计算方法：
玉米浆干粉加入的比例＝培养基中玉米浆的量×玉米浆的氨基氮/玉米浆干粉的氨基氮
玉米浆干粉具体的加量还是要根据实验来确定。
用20-25％无菌甘油洗下孢子，即是终浓度。
一代斜面最多在4度冰箱冷藏1-2个月，时间长了会对活力产生影响。
我们使用甘油管先传一代斜面，用一代斜面传二代斜面，再接种摇瓶。一般是甘油管保藏菌种多做，现用现传，做甘油管保藏的菌种最好用克氏瓶培养，这样可以多做一些甘油管。如果是做实验不是生产用的话，可以考虑甘油管保藏的菌种直接接种摇瓶种子，我做过一种放线菌产抗生素的培养，就是直接用甘油管接种摇瓶，培养24小时后再用摇瓶种子接种摇瓶扩大培养，摇瓶种子长好后接种实验罐。
希望对你有帮助
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16楼2012-05-09 12:36:53
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普通回帖

流浪的苹果

金虫 (小有名气)
玉米浆是那里的？还是自己做的？
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那是牛顿的苹果，不是我的！
2楼2012-05-06 18:53:29
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雨帘静思

铁杆木虫 (正式写手)
雨帘静思: 回帖置顶 2012-05-08 11:02:51
雨帘静思: 取消置顶 2012-05-08 11:03:10
引用回帖:
2楼: Originally posted by 流浪的苹果 at 2012-05-06 18:53:29:
玉米浆是那里的？还是自己做的？

买公司的。。。
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3楼2012-05-06 21:41:15
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wgy2007

木虫 (小有名气)
培养基中有玉米浆时调pH出现絮状物正常，即使用玉米浆干粉也是这样，应该是是没问题的，我们一直是这么用的，灭完菌后放置一段时间絮凝物会沉降下来，用的时候摇一摇即可混匀，我们一般调pH用的NaOH的浓度是0.5mol/L。
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4楼2012-05-07 10:11:52
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hejiangbo

木虫 (著名写手)
不错！
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兜兜转转半生已过
5楼2012-05-07 11:36:29
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wjf008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
絮状的沉淀是正常的，因为玉米浆的成分比较复杂，尤其是水中含有杂质阴离子时更容易出现沉淀。调pH使用的NaOH浓度以2.5mol/L为好，配制简单，浓度适中，太稀了稀释作用明显。
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6楼2012-05-07 11:38:59
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zhen_fang

银虫 (正式写手)
高温灭菌之后，没啥问题了就
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7楼2012-05-08 09:42:06
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雨帘静思

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wjf008 at 2012-05-07 11:38:59:
絮状的沉淀是正常的，因为玉米浆的成分比较复杂，尤其是水中含有杂质阴离子时更容易出现沉淀。调pH使用的NaOH浓度以2.5mol/L为好，配制简单，浓度适中，太稀了稀释作用明显。

您好，调节种子培养基所使用的氢氧化钠的浓度和配罐时所用的氢氧化钠的浓度可以一样吗？
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9楼2012-05-08 11:00:13
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雨帘静思

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhen_fang at 2012-05-08 09:42:06:
高温灭菌之后，没啥问题了就

谢谢您了。。。。灭菌之后是有沉淀的。这样会不会影响培养基的成分？
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10楼2012-05-08 11:01:15
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