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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 询问培养基调pH时的问题
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雨帘静思

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 询问培养基调pH时的问题

大家好，我做的是头孢类的发酵试验。菌种为顶头孢霉菌。
在做种子培养基的时候里面需要加入玉米浆，当调节pH的时候用氢氧化钠进行调节。可能以前没有注意，最近每次调完pH（6.5）之后培养基总是有一定量的絮状沉淀，不知道是不是正常，搅拌之后分布于培养基中，可是几分钟之后还是沉在瓶底，不知道是什么原因。
还有，在调节pH的时候氢氧化钠的浓度最好是多少？以前就是随便加的量，后来感觉这样可能会对培养基的成分产生影响。所以改为较低浓度的氢氧化钠（0.1-0.2mol/L）进行，但是这样又会使培养基的体积发生了很大的变化。
求助大家该怎么办啊？
谢谢
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1楼2012-05-06 11:38:54
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wgy2007

木虫 (小有名气)
培养基中有玉米浆时调pH出现絮状物正常，即使用玉米浆干粉也是这样，应该是是没问题的，我们一直是这么用的，灭完菌后放置一段时间絮凝物会沉降下来，用的时候摇一摇即可混匀，我们一般调pH用的NaOH的浓度是0.5mol/L。
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4楼2012-05-07 10:11:52
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
玉米浆的质量不稳定，对微生物的培养会有一定的影响，可以根据总氮或氨基氮调节配比。如果用量不大的话可以买点玉米浆干粉替代玉米浆使用效果会好了一些，我是做细菌素发酵的，以前做种子时用玉米浆，偶尔也会出现种子不长的情况，后来种子培养基改用玉米浆干粉，上海西王的，现在一直在用，效果不错，再没有出现过种子不长的情况。菌种保藏用20-25％的无菌甘油洗下孢子，1ml/冻存管 -80度保藏。使用时斜面或平板活化即可。
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12楼2012-05-08 14:32:21
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wgy2007

木虫 (小有名气)
我们灭菌前调pH7.0-7.5，灭菌后会有很多沉淀的，不影响微生物的生长。
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13楼2012-05-08 14:34:51
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

雨帘静思: 回帖置顶 2012-05-09 13:34:21
测总氮用凯氏定氮法，我们是用定氮仪测的，方法很简单，氨基氮是用甲醛滴定法测的，方法在网上应该能查到，如果查不到给我个邮箱号，我发给你。
按总氮加玉米浆干粉的计算方法：
玉米浆干粉加入的比例＝培养基中玉米浆的量×玉米浆的总氮/玉米浆干粉的总氮
按氨基氮加入玉米浆干粉的计算方法：
玉米浆干粉加入的比例＝培养基中玉米浆的量×玉米浆的氨基氮/玉米浆干粉的氨基氮
玉米浆干粉具体的加量还是要根据实验来确定。
用20-25％无菌甘油洗下孢子，即是终浓度。
一代斜面最多在4度冰箱冷藏1-2个月，时间长了会对活力产生影响。
我们使用甘油管先传一代斜面，用一代斜面传二代斜面，再接种摇瓶。一般是甘油管保藏菌种多做，现用现传，做甘油管保藏的菌种最好用克氏瓶培养，这样可以多做一些甘油管。如果是做实验不是生产用的话，可以考虑甘油管保藏的菌种直接接种摇瓶种子，我做过一种放线菌产抗生素的培养，就是直接用甘油管接种摇瓶，培养24小时后再用摇瓶种子接种摇瓶扩大培养，摇瓶种子长好后接种实验罐。
希望对你有帮助
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16楼2012-05-09 12:36:53
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